Exprimarea pax8 în țesuturile renale normale și neoplazice un studiu imunohistochimic -

pax8

  • rezumat
  • Principal
  • Material si metode
  • Rezultate
  • Expresia de PAX8 în rinichiul adult normal, uretere și vezica urinară
  • Expresia de PAX8 în tumorile epiteliale renale
  • Expresia de PAX8 în carcinomul urotelial al pelvisului renal, ureterelor și vezicii urinare
  • Expresia de PAX8 în RCC metastatic
  • Discuţie

rezumat

Principal

Factorii de transcripție specifici liniei celulare au apărut recent ca markeri diagnostici valoroși pentru tumorile umane. Aceste proteine ​​sunt exprimate în tipuri limitate de țesuturi embrionare și sunt necesare pentru creșterea și diferențierea acestor țesuturi în țesuturi sau organe foarte specializate. Deoarece unele proteine ​​continuă să fie exprimate în țesuturi diferențiate în timpul vieții adulte sau în țesuturi neoplazice din aceeași linie celulară, detectarea acestor proteine ​​ar putea indica locul primar sau trăsătura diferențiată a unei tumori. Markerii diagnostici bine stabiliți în această categorie includ TTF-1, 1, 2 CDX2, 3 MITF, 4 și miogenină. 5, 6

Carcinomul cu celule renale (RCC) este cunoscut pentru predilecția sa pentru invazia vasculară și metastazele la distanță. Un număr semnificativ de cazuri prezintă creștere extrarenală sau metastază în momentul diagnosticului sau după operație. 7 Datorită diverselor sale caracteristici histologice, RCC metastatic poate fi o provocare de diagnostic și adesea necesită teste auxiliare, cum ar fi imunohistochimia, pentru confirmare. 8 Mulți producători, inclusiv citokeratine (CK), CK7, CK20, EMA, vimentin, 9 c-kit, 10 P504S, 11 marker RCC, 12, 13 aquaporin-1, 14 CD10, 15 și anhidrază carbonică 9 (CAIX) 16, 17 au fost utilizate în diferite panouri cu sensibilitate și specificitate variabile.

Material si metode

O sută patruzeci și trei de tumori epiteliale renale primare și 39 de metastaze au fost utilizate în acest studiu. Probele de tumori epiteliale renale primare au provenit din probe de nefrectomie radicală și au fost construite pe microarrays cu cinci țesuturi, cu trei nuclee reprezentative de 1 mm din fiecare caz. Au fost utilizate secțiuni convenționale de țesut din tumori metastatice. Patruzeci de carcinoame uroteliale ale vezicii urinare au fost, de asemenea, incluse într-un singur microarray tisular, care a fost creat în același mod ca și pentru tumorile epiteliale renale primare. Controalele normale ale țesutului au inclus 40 de nuclee de parenchim renal neafectate conținute în microarraysurile de țesut, precum și secțiuni de țesut din zonele pelvine renale neimplicate (N = 5), uretere (N = 5) și vezica urinară (N = 10).

Colorarea imunohistochimică PAX8 a fost efectuată pe auto-colorarea Dako cu anticorp policlonal anti-PAX8 de iepure (1: 100) (Poteintech, Inc., Chicago, IL, SUA). În rezumat, secțiunile de țesut încorporate în parafină (5 μm grosime) au fost obținute din TMA sau blocuri de țesut și coapte peste noapte în cuptor la 60 ° C. Secțiunile au fost depozitate secvențial și deshidratate cu PRO-cleanter. PAR (Anatech, Battle Creek, MI, SUA) Într-o serie de concentrații descendente de alcool și apă. Recuperarea antigenului a fost efectuată prin aburirea secțiunilor timp de 40 de minute și răcire timp de 20 de minute în trilogia etichetei celulare cu soluție de acid etilendiaminetetraacetic (EDTA). După recuperarea antigenului, secțiunile au fost incubate cu soluție tamponată Tris cu Tween-20 timp de 5 minute și apoi încărcate în sistemul automat de colorare Dako. Sistemul EnVision (Dako) a fost utilizat pentru a vizualiza anticorpul primar cu contracolor de hematoxilină.

Sensibilitatea și specificitatea anticorpului PAX8 au fost validate cu o varietate de țesuturi normale și numai colorarea nucleară distinctă a fost considerată pozitivă pentru PAX8. 29 O colorare pozitivă difuză este denumită> 50% din celulele tumorale colorate pozitiv pentru PAX8; în caz contrar, colorarea a fost considerată pozitivă focal. Pentru CRC metastatice, cazurile cu colorare de celule tumorale> 5% pentru PAX8 au fost considerate pozitive. Intensitatea colorării PAX8 în tumori a fost evaluată ca slabă (1+), moderată (2+) și puternică (3+).

Rezultate

Expresia PAX8 în rinichi, uretere și vezică urinară normală pentru adulți

Colorarea PAX8 a fost detectată în celulele epiteliale ale tubulilor renali proximali și distali, buclele Henle, canalele colectoare și celulele epiteliale parietale ale capsulei Bowman (Figura 1a și b). Colorarea a fost întotdeauna mai puternică în tubulii distali, în celulele parietale ale capsulei Bowman și în canalele colectoare (3+) decât în ​​tubii proximali (1+), în care s-a observat și colorarea citoplasmatică nespecifică. Colorarea puternică PAX8 (3+) a fost detectată în toate straturile celulelor uroteliale de căptușeală din papila renală și în porțiunea inițială a pelvisului renal. În pelvisul și ureterele renale distale, celulele PAX8 pozitive au fost limitate treptat la straturile intermediare sau bazale ale uroteliului cu intensitate scăzută de colorare (2+) (Figura 1c-e). Nu a existat nici o colorare PAX8 în uroteliul vezicii urinare (Figura 1f). Colorarea PAX8 nu a fost detectată în podocite, celule mezangiale, celule endoteliale sau în structurile vasculare interstițiale sau limfatice ale rinichiului.