Zakin, Mario Manuel
W UNIVERSITY OF BUENOS AIRES FACULTATEA DE ȘTIINȚE EXATTE ȘI NATURALE 110 n dintr-una de fixare a oglindăqinmigganancia sau imnocmmatogggia g studiul virusului merge la re Mario Mama]. Zakin Rezumatul tezei Anul 1963
UNIVERSIDAD DE-BUBNOS AIRES FACULTY OF EXACT AND NATURAL SCIENCES Applicationggión dg gg t6c3 gaa de tljggión do cggnlcnonto 1nnnnorluo ggggggcig and immunochronatosgggy to the study of the virus do la waste grcigg Mario Manuel Zakimica Chemistryation 1963.
Sponsor al tezei: Dr. Osvaldo A.Peso
aim ÉES Y METONS te le 1) mguoreecemil e) Antigenoedricee Organele naturii animalelor infectate]. și experimental pesta porcină. A Tutoriale utilizate în le prinre. o parte din experiență provine din enimele infectate experimental și ciuma-pace-cinema. dacă, ca de enilalea aparținând piciorului eoepechoean, aceste ultime organe au fost emiedoe din diferite țări dd. puncte Pentru a doua serie de învățături, porcii de 25 și 30 kg au fost infectați cu 2 1. iqyeotedos eubeutáneemente. a unei 17 suspensii a virusului pestei porcine LM13, utilizat: ca material de descărcare la Laboratoriosmi. Enimlee a fost sacrificat între a treia și a opta zi după infecție și sărutul a fost colectat. ganglion și rinichi. b) sera și globalinaa A - Serul hiperinnim al pestei porcine. obținută prin inocularea defibrinei virulente la porci care aveau deja o anumită imunitate anterioară. aea prin vaccinare, .vezi de boală. Serul a fost furnizat Laboratoarelor Fuerte Sancti Spiritu. // 9
B - Suoro do antiporoino iepure, obținut prin inoculare succesivă. cu nacho sau umăr, cu doze de ser porcin normal. Dozele zilnice au variat de la 0,1 la 0,2 1 și numărul de vaccinări a fost de 16, administrate pe o perioadă de un an și jumătate. În prima inoculare, au fost utilizate măslinele Freund, cu un raport de 2 la 1 în funcție de adjuvant. Titrele obținute prin modificarea toxicității proepitinei au variat între 1/12800 și întregul nivel. fiecare animal era următorul: Inoo. nl m1 N 'nat. Freund vi t1 m90 face inocularea 1. Primul. 2 ac x) 2 0 1 '1P (x) 1 Banana după 3 0. 1 o 1n (m) 2 an 4 O. 1 - o 2 nn 5 0.1-1p 3 nn 6 Q. 1 - m 2 nn 7 0.1 oo 2 a 8 0.15-1p 3 a 9 0. 15-13 2 nn 10 Oo15 - o 2 a 11 0.15 sau 1p 3 nn 12 0.15-1! 2 n n 13 0.15 o o 2 n n 14 Oo2-1p 3 n n 15 0.2 c 1m 2 n n 16 0. 2 o e 2 u n (x) ao - euboutánnu (zz) 1p a intraporitonoal (xxx) 1. - intranusoulor llo
la temperatura camerei și apoi contrifugate, două straturi de precipitat. 11.- purificare prin trecere prin coloana DEAEceluloză. conform tehnicii ds Courtsin (28). DEAEceluloza, odată spălată și adusă la pH 6, a fost suspendată într-un tampon 0,02 M, pH 6 (tampon fosfat). în timp ce substanța conjugată. a purifica. a fost dializat peste noapte împotriva unuiași toba de eșapament. Fracția purificată de interes. A fost diluat cu tampon 0,02 MpH 6, în timp ce impuritățile au fost eliminate din coloană cu un tampon pH 5,2, deja descris anterior. Lichidul a fost concentrat la volumul inițial prin dializă împotriva Carbowax 20 M. I - Ser normal porcin. obținut din leonii din turme libere de pestă porcină. și nevaccinat. o) Soluții și reactivi A- CIN. soluție fiziologică fosfat sodic-cosososos. 801 8 P0HI. 0 0,00,0. - 2048 4 2 2 Apă distilată în special. PH 7-8 "811 B - Tampon carbonatobioarbonsto 1000 ml oooooooooooooooooo ÜO3HNh 0.000.000.00000000 Capac distilat Agus. 400 m1 PH 9 G // 17
c - Tampon pentru dializă a proteinei conjugate cocoootneoe100.00.00.000032 g eeeoeeeeeoeeeeeo 7.2g Aguad'atilad. glugă. o.u40 0,1 PH 7 D- Tampon veronal pentru electroforeză veronalsodică. 7,33 g acetat de sodiu. 01H0.1N. 4,86 g 45ll Apă distilată osp. 750m1 ph 8.6 E o Reactivi folosiți în Koch și Malbekin modificat (1924) metodeolorln trioo: - Soluție de digestie: Soluția de sulfat de cupru 5% a fost amestecată cu 100 ml de acid sulfuric concentrat și pur. Soluția obținută a fost turnată cu atenție în 100 ml de apă distilată. Soluție martor de sulfat de amoniu: 9,4332 g de sulfat de monica pur și seoo au fost dizolvate în 3043! 0,2 N pentru a completa 1000 m1. Soluția 80 32 0,2 N a fost obținută prin dizolvarea a 5,6 1 de acid concentrat în apă până la obținerea a 1000 ml. Această soluție concentrată conținea 2 pl de R per nl și a fost necesară diluarea acesteia pentru a o folosi ca martor Apă în 20 nl (40 mg de N) soluție concentrată de sulfat de amoniu. S-au adăugat 180 nl de SO4H20.2N și s-au completat până la un litru cu apă distilată. Fiecare ml din această soluție a corespuns cu 0,04 Ig de I. // 18
- Reactiv Neeeler: 22,5 g de iod s-au dizolvat în 20 nl de ana conținând 30-5 de IK. Odată ce dizolvarea a fost finalizată, s-au adăugat 30 g de Hgmetallic și s-a făcut bine, evitând amestecul la cald, răcindu-se într-un curent de fund. Amestecarea a fost continuată până când culoarea iodului însuși a dispărut. Lichidul supernatant a fost decantat și reacția testată împotriva unei soluții de amidon. Când reacția este negativă. reactivului i s-a scos mercurul. așa că a adăugat câteva picături de iod cu aceeași concentrație anterioară. S-a adăugat iod până la o reacție ușor pozitivă împotriva amidonului. Soluția a fost diluată cu apă pentru a umple volume de OHNeal lofil Buffere folosit 200 ml și apoi amestecat cu doi în cromatografie pe coloană sau tampon fosfat 0,2 MpH 6,3: 387 ml de 0,2 MPOHN 4 2 (A) s-au topit cu 112,5 ml de la 0,2 la 204 HN32 (B); În acest fel, am avut un tampon fosfat 0,2 M cu pH 6,3. Din mâncare. Soluția a luat 100 pl și s-au adăugat 1040 ml apă distilată. tamponul fosfat 0,0175 MpH 6,3. - Tampon fosfat 0,02 MpH 6: dacă s-au obținut 877 nl de (A), s-au amestecat cu 123 ml de (B), obținându-se un tampon fosfat 0,2 H ph 6. Se diluează 100 1 și 1000 ll cu apă distilată și se obține tamponul 0t02 l ph 6. // 19