Profilul imunohistochimic al nevilor Spitz și melanoamelor convenționale (non-spitzoide)
Subiecte
rezumat
Principal
Nevul Spitz este o leziune melanocitară dobândită, care se dezvoltă de obicei la copii și adolescenți, deși nu este neobișnuit la adulți. Se crede în mod clasic că este benign și gestionat conservator. Cu toate acestea, de la descrierea sa din 1948 de către Sophie Spitz1, diagnosticul său a fost un motiv de îngrijorare, deoarece nu este întotdeauna posibil să se facă un diagnostic fără echivoc al nevusului Spitz versus melanom.
Deși anumite caracteristici sunt acum evaluate în mod sistematic pentru a face distincția între nevii Spitz și melanoame, diferiți experți pot varia în definirea importanței relative a fiecăruia dintre următoarele criterii: dimensiune, formă, circumscripția cuiburilor joncționale, răspândirea ascendentă în epidermă, extinderea spre globule subcutanate, eozinofile, figuri mitotice și localizarea lor superficială sau profundă în tumoră, celule gigantice, prezența ulcerației și modificări ale stromei. 2, 3, 4, 5 Mai mult, majoritatea leziunilor nu prezintă multe dintre criteriile convenționale care sunt utilizate în mod obișnuit pentru diagnosticul histopatologic al tumorii, ceea ce subliniază lipsa unor criterii obiective pentru a prezice comportamentul biologic al acestor leziuni. 3, 6, 7 Clasificarea unor cazuri ca metastaze Spitz nevi 1 ilustrează dificultatea de a distinge cu exactitate unii Spitz nevi de melanom bazându-se exclusiv pe criterii histologice. Prin urmare, termenul de diagnostic „tumoră Spitz atipică” este utilizat pentru a descrie leziunile care se abat de la aspectul tipic al nevilor Spitz și au o semnificație biologică incertă. 7
Deoarece diagnosticul unui subset de leziuni rămâne dificil, scopul acestui studiu a fost de a evalua expresia unui grup mare de markeri utilizând metode imunohistochimice de rutină pentru a furniza un set universal disponibil de proteine pentru a face distincția între nevusul Spitz și nevusul. Melanom. Am comparat semnăturile de exprimare a proteinelor în ambele serii de nevome tipice Spitz și melanoame în fază de creștere verticală, în încercarea de a stabili un instrument puternic care să permită predicția comportamentului biologic al leziunilor melanocitice. Rezultatele oferă un set de nouă markeri exprimați diferențial în nevomele Spitz vs melanoamele utile în diagnosticul diferențial al ambelor leziuni melanocitice.
Materiale și metode
Construirea de probe de țesut și matrice de țesut
Au fost studiate un total de 90 de eșantioane incluse în parafină și fixate cu formalină din arhivele Departamentului de Patologie, Spitalul Universitar 12 de Octubre, Madrid, colectate între 1995 și 2005. Douăzeci și opt au corespuns neviilor tipici Spitz, în concordanță cu caracteristicile cuiburilor melanocitelor axiale și/sau epitelioide, mărimea 3 și 62 melanoamelor non-spitzoide în faza de creștere verticală primară. Faza de creștere verticală a fost definită în conformitate cu criterii prestabilite: 8 toate cuiburile de celule tumorale din epidermă sunt mai mici decât cel puțin unul în derm, prezența celulelor tumorale dermice cuiburi de 25 sau mai multe celule și activitate mitotică în celulele neoplazice intradermice . Pacienții cu melanom au fost tratați conform criteriilor standard: rezecție chirurgicală cu margini adecvate. Interferonul adjuvant sau terapiile de chimioterapie pentru boala metastatică au fost utilizate atunci când au fost indicate clinic.
Secțiunile reprezentative colorate cu hematoxilină-eozină au fost evaluate pentru caracteristicile histologice ale autorilor și blocurile au fost selectate pe baza unui țesut adecvat (cel puțin 1 mm grosime) 9 pentru a construi matricile de țesut.
Au fost asamblate un microarray de țesut care conține Spitz nevi și încă două cu melanoame VGP, așa cum s-a descris mai sus, 9 incluzând cel puțin două piese cu diametrul de 1,5 mm din zonele cu celule ridicate ale blocurilor de parafină primare. În plus, țesuturile normale (mai ales ganglionii limfatici reactivi, amigdalele și pielea) au fost plasate pe tablouri ca controale interne.
Sistem imunohistochimic și notare.
Colorarea imunohistochimică a fost efectuată pe secțiuni de țesut de 3 µm din blocurile de microarray de țesut folosind 22 de anticorpi primari diferiți împotriva proteinelor biologic relevante (sursă și concentrație enumerate în tabelul 1). Imunodetecția a fost efectuată cu sistemul de vizualizare LSAB sau Envision (ambele de la Dakocytomation, Glostrup, Danemarca) folosind ca substrat diaminobenzidină cromogen. Toate secțiunile au fost colorate în contracurent cu hematoxilină (DAKO).
Masă completă
Controalele negative au fost obținute prin omiterea anticorpului primar. Selecția pragului și controalele interne pentru anticorpi au fost stabilite anterior pentru a facilita reproductibilitatea metodei în conformitate cu literatura publicată 9 (vezi Tabelul 1). Toate cazurile au fost punctate independent de doi patologi și au fost înregistrate ca pozitive ținând cont de expresia proteinei din celulele neoplazice și de tăierea specifică pentru fiecare marker. Orice discrepanțe în procentul de celule pozitive au fost rezolvate prin reevaluare simultană a secțiunilor.
Analiza statistică
Testul exact al lui Fisher a fost utilizat pentru a evalua dacă o expresie specifică a proteinelor a fost asociată cu o leziune dată, fie că este vorba de nev Spitz sau melanom. Semnificația statistică a fost încheiată pentru valorile p 10 pentru a evita influența testelor multiple. Datele clinice și histopatologice au fost compilate după efectuarea tuturor studiilor statistice (Tabelul 2).
Masă completă
Rezultate
Caracteristici clinice și histopatologice.
Seria cuprinde 90 de pacienți (52% femei și 48% bărbați) cu vârste cuprinse între 3 și 91 de ani. Vârsta medie a pacienților cu nevii Spitz și melanom a fost de 21,6 și respectiv 62 de ani. Localizarea leziunilor a fost cunoscută în 71 din 90 de cazuri (79%), fiind cele mai frecvente extremități pentru nepii Spitz (46%) și trunchiul pentru melanoame (31%). Toți pacienții cu nevii Spitz erau în viață fără metastaze, în timp ce 56% (35 din 62) dintre melanoamele cu creștere verticală au dezvoltat metastaze și 34% (21 din 62) au murit.