Populațiile naturale de celule ucigașe și activitatea citotoxică la porcii hrăniți cu lapte

celule

  • Subiecte
  • rezumat
  • Fundal:
  • Metode:
  • Rezultate:
  • Concluzie:
  • Principal
  • Rezultate
  • Mărimea populației de celule NK
  • Exprimarea ARNm-ului Intelectin-2 în celulele NK izolate din PBMC
  • Citotoxicitatea celulelor NK
  • Expresia genei asociate celulelor NK în celulele NK izolate din PBMC
  • Discuţie
  • Metode
  • Produse chimice
  • bLf
  • Tratamente dietetice și protocol animal
  • Colectie de mostre
  • Izolarea PBMC
  • Izolarea totală a celulelor splinei și MLN
  • Izolarea celulelor NK și identificarea fenotipică pentru puritate
  • Test de citotoxicitate a celulelor NK prin citometrie în flux
  • Identificarea fenotipică a celulelor mononucleare din sânge și a celulelor MLN totale și a splinei
  • Expresia genei celulei NK
  • Analiza statistică
  • Declarația de sprijin financiar
  • Revelatie
  • Informatie suplimentara
  • Fișiere Powerpoint
  • Figura suplimentară S1.

Subiecte

  • Celulele NK
  • Nutriție
  • Pediatrie

rezumat

Fundal:

Celulele ucigașe naturale (NK) sunt componente ale sistemului imunitar de apărare înnăscut, iar nivelurile lor diferă între sugari și sugari hrăniți cu formulă (FF). Lactoferina (Lf) modulează citotoxicitatea celulelor NK ex vivo. Am emis ipoteza că dieta bovină Lf (bLf) ar crește populațiile de celule NK și citotoxicitatea.

Metode:

Purceii au fost crescuți cu scroafe (SR), FF sau 1 g/l alimentat bLf (LF) timp de 21 de zile. Celulele NK (CD3 - CD4 - CD8 +) din sânge (celule mononucleare din sânge periferic (PBMC)), splină și ganglion limfatic mezenteric (MLN) au fost determinate prin citometrie de flux. Celulele PBMC NK au fost testate pentru activitatea citotoxică împotriva celulelor țintă K562 ex vivo în prezența mediilor (nu stimulate), interleukină-2 sau bLf. Expresia ARNm a celulei NK a fost determinată prin transcripție inversă cantitativă PCR.

Rezultate:

Porcii SR și LF au avut mai multe celule NK în MLN (P = 0,0097) și splină (P = 0,0980) decât purceii FF. În PBMC, purceii SR au avut mai multe celule NK decât purceii FF (P = 0,0072); Purceii LF au fost intermediari și nu diferiți de purceii FF sau SR. Expresia ARNm a intelectinei-2 celulare NK a fost de 2,5 ori mai mare (P = 0,0095) în LF decât purceii SR sau FF. Celulele NK din purceii SR au prezentat activitate citotoxică mai mare (P

Abundența de ARNm de Intelectin-2 a fost mai mare în celulele ucigașe naturale de la purcei hrăniți cu bLf în vârstă de 21 de zile (LF, n = 3) decât la cei crescuți cu scroafe (SR, n = 7) sau cu formula hrănită (FF, n = 6) animale. Valorile normalizate pentru intelectina-2 au fost calculate prin împărțirea cantității țintă medii la cantitatea medie a genei de referință (peptidilprolil izomeraza A). Diferența de ori a fost calculată pentru fiecare măsurare prin împărțirea valorilor țintă normalizate la valoarea țintă medie normalizată pentru porcii FF. Datele sunt exprimate ca medie ± SD a diferenței de pliuri față de animalele FF. * P ≤ 0,05. bLf, lactoferină bovină.

Imagine la dimensiune completă

  • Descărcați diapozitivul PowerPoint

Citotoxicitatea celulelor NK

Celulele NK izolate din PBMC de la animale SR, nestimulate sau stimulate cu interleukină-2 (IL-2) sau bLf, au prezentat activitate citotoxică mai mare (P

Citotoxicitatea celulelor ucigașe naturale (NK) izolate din scroafe crescute în vârstă de 21 de zile (SR; n = 11; neagră), hrănite cu formula (FF; n = 14; alb) și hrănite bLf (LF; n = 11 purcei gri). Celulele NK cu celule mononucleare din sânge periferic (PBMC) au fost fie nestimulate (Unst), fie stimulate cu interleukină-2 (IL-2) (20 ng/ml) sau Lf (25 μg/ml) și incubate timp de 48 de ore cu DiOC 18 marcat K562 celule țintă cu un raport de efect 10: 1 la celula țintă. Iodura de propidiu (PI) a fost adăugată la sfârșitul incubației pentru a marca celulele moarte. Citotoxicitatea este raportată ca celule țintă distruse (PI + DiOC 18 +) ca procent din totalul celulelor țintă (DiOC 18 +). Datele sunt exprimate ca medie ± SD. Proc complet model liniar generalizat (GLM) model complet, P † indică diferențe semnificative între diete. bLf, lactoferină bovină.

Imagine la dimensiune completă

  • Descărcați diapozitivul PowerPoint

Expresia genei asociate celulelor NK în celulele NK izolate din PBMC

Într-un efort de a determina posibilele mecanisme moleculare care ar putea contribui la scăderea activității citotoxice a celulelor NK ale animalelor FF și LF, s-a efectuat o transcriere inversă PCR cantitativă pe ARN extras din celulele CD3 - CD4 - CD8. + NK din sânge periferic nestimulat ( Figura 3 ) Abundența de ARNm de perforină, o moleculă efectoare pentru celulele NK, a fost de trei și de șase ori mai mică în celulele NK de la purcei FF și respectiv LF decât la purceii SR (P = 0,0038, Figura 3a ). În plus, expresia receptorului D al membrului NK din grupa 2 (NKG2D), un receptor activator găsit pe celulele NK și cunoscut sub numele de receptorul subfamiliei K 1 al receptorului asemănător lectinei al celulelor ucigașe, a fost de 3,5 ori mai mic în Celulele NK ale animalelor FF decât la cele ale animalelor SR, în timp ce expresia genei receptorului NKG2D în celulele NK ale animalelor LF a fost intermediară și nu a fost semnificativ diferită de oricare dintre grupuri ( Figura 3b ).

Perforin ( la ) și receptorul D al grupului NK 2 (NKG2D) ( ) Abundența ARNm în celulele ucigașe naturale izolate din scroafe crescute la 21 de zile (SR, n = 7), formula hrănită (FF, n = 4-5) și purceii hrăniți cu bLf (LF, n = 3). Valorile normalizate pentru genele țintă au fost calculate prin împărțirea cantității medii dorite la cantitatea medie a genei de referință. Diferența de ori a fost calculată pentru fiecare măsurare prin împărțirea valorilor țintă normalizate la valoarea țintă medie normalizată pentru porcii FF. Datele sunt exprimate ca medie ± SD. Diferitele indicatoare (*, †, ‡) indică diferențe semnificative la P ≤ 0,05. bLf, lactoferină bovină.