Cuantificarea prolinei libere în dieta bovinelor meliponícola din provinciile Matanzas și
1 Stație experimentală de pășuni și furaje Indio Hatuey, Universitatea din Matanzas, Ministerul Învățământului Superior. Central España Republicana, CP 44280, Matanzas, Cuba.
2 Facultatea de Farmacie, Departamentul de Nutriție și Bromatologie, Universitatea din Salamanca, Spania.
3 Departamentul de Botanică și Fiziologie a Plantelor, Universitatea din Salamanca, Spania
Cuvinte cheie: aminoacizi; Miere; polen.
Cuvinte cheie: aminoacizi; Miere; polen
În Cuba, vitele meliponícola sunt alcătuite din toți stupii gestionați, aparținând speciei Melipona beecheii Bennett, 1831 (Apidae: Meliponini), înregistrată sau nu (Lóriga, 2015). Ca în orice altă turmă, este de o importanță vitală menținerea sănătății animalelor prin acțiunea mecanismelor de apărare (colective și individuale) oferite de sistemul imunitar.
La albine, acest sistem este format din componente celulare și umorale (Bulet și colab., 1999). Mecanismele de apărare celulară sunt mediate de hemocite, care locuiesc în hemolimfă și sunt implicate în special în fagocitoză și încapsulare (Chapman, 2013). Răspunsul umoral implică sinteza peptidelor antimicrobiene, care acționează ca răspuns la infecțiile produse de bacterii, ciuperci și paraziți (Gätschenberger și colab., 2013).
Potrivit lui Gutiérrez și Orduz (2003), printre cele mai studiate peptide antimicrobiene se numără abaecina, prezentă în hemolimfa albinelor, compusă din între 34 și 39 de aminoacizi. Prolina, care se remarcă printre acești aminoacizi, are o activitate antimicrobiană marcată împotriva bacteriilor gram pozitive și gram negative.
Pentru a funcționa, sistemele biologice au nevoie de elemente nutriționale care provin dintr-un set de alimente furnizate prin dietă. La albine, acestea corespund în principal polenului și nectarului (Brodschneider și Crailsheim, 2010). Ambele sunt de o importanță vitală pentru sistemul imunitar al acestor insecte (Di Pasquale și colab., 2013).
Pe baza celor de mai sus, datorită importanței contribuției acestui aminoacid în dieta albinelor pentru buna funcționare a sistemului lor imunitar, această lucrare a vizat determinarea cantității de prolină liberă, prezentă în alimentele consumate (polen și miere) ) de bovine meliponícola din provinciile Matanzas și Mayabeque.
Materiale și metode
Locație. Studiul a fost realizat în două meliponarii. Una este situată în zona Pastorita, municipiul Matanzas, în provincia Matanzas, iar cealaltă este situată în zona Consiliului Popular Nord al municipiului San Nicolás, în Mayabeque.
Mostre 10 stupi au fost selectați la întâmplare, cinci în fiecare scenariu. În Mayabeque au fost selectați stupii 14, 2, 48, 5 și 6. În Matanzas, au fost selectați stupii 1, 9, 11, 12 și 13. În fiecare dintre stupi, 60 g de polen meliponícola și 80 ml de miere. Prelevările de probe au fost efectuate în aprilie 2018.
Curba de calibrare. A fost stabilit prin utilizarea standardelor de prolină de concentrație diferită, supuse aceluiași proces indicat pentru probe. Curba de calibrare a fost elaborată cu datele de absorbanță ale standardelor din diferitele concentrații de prolină și s-a găsit ecuația liniei de calibrare.
Determinarea prolinei libere în miere. 2,5 g de miere omogenizată au fost cântărite la cea mai apropiată precizie de 0,1 mg. Au fost dizolvate în apă folosind agitatorul magnetic. Apoi, au fost transferați într-un balon volumetric de 5 ml și soluția a fost completată până la semn. Ulterior, s-au luat 0,5 ml și s-au adăugat 0,25 ml acid formic 98% (H-COOH), de la furnizorul de materiale de laborator PROLABO, și s-au adăugat 1 ml soluție de ninhidrină 3%. În mod similar, s-a pregătit un martor, în care soluția de lucru a fost înlocuită cu 0,5 ml de apă distilată. Ulterior, tuburile au fost închise, agitate și ținute timp de 15 minute într-o baie de apă clocotită. Odată ce acest proces a fost terminat, au fost scoase din apa fierbinte și lăsate să se răcească la temperatura camerei timp de 5 minute. S-au adăugat 5 ml soluție de izopropanol-apă și s-au agitat energic. În cele din urmă, absorbanța a fost măsurată la 517 nm față de martor, care a fost, de asemenea, tratată în cele 35 de minute care au urmat răcirii.
Calcule și exprimarea rezultatelor. Dacă C este µg/ml de prolină, obținut din curba de calibrare, iar P (g) este greutatea mierii care a fost utilizată în proba analizată, ar fi necesar să:
mg/kg miere = 5C/P
Determinarea prolinei în polen. S-au extras aminoacizii liberi. Pentru a face acest lucru, au fost cântărite cu o precizie de aproximativ 0,1 mg, s-au adăugat 0,25 g de polen meliponícola și 25 ml de etanol 80%. Ulterior, timp de 30 de secunde, soluția a fost despărțită de sonicator. Apoi, au fost menținuți sub agitare timp de 15 minute înainte de a trece la centrifugare (5 min. La 10.000 rpm) și decantarea supernatantului. Această procedură de extracție a fost efectuată de încă două ori pe precipitat. Extractul etanolic rezultat a fost adus la uscare într-un evaporator rotativ, fără a depăși 40 ° C. Ulterior, reziduul a fost resuspendat în apă ultra pură și a fost completat până la 25 ml. Pentru filtrarea sa, s-au utilizat filtre milipore de 0,45 microni. În cele din urmă, s-au luat 0,5 ml de filtrat și s-a procedat ca la determinarea în miere.