STAREA STRESULUI OXIDATIV ÎN FICATUL GRAS EXPERIMENTAL LA ȘOARELII DE BĂRBAȚI ȘI PROIECȚIA SA

Sursa: Consiliul pentru Dezvoltare Științifică, Umanistică și Tehnologică a Universității Centroccidentale "Lisandro Alvarado" (UCLA, Venezuela)

starea

Beneficiar: Aura América Lуpez-Ortega, Ysabel Cristina Mбrquez-Alvarado, Aleidy Josefina Aranguren-Parra, Miguel Бngel Plaza- Carriуn și Marнa Divina Murillo Lуpez de Silanes

Cuvinte cheie: ficat gras, etionină, stres oxidativ, disfuncție.

Rezumat: În medicina veterinară, rolul stresului oxidativ (OS) în producția și reproducerea animalelor a devenit important datorită alterării ambelor funcții la animalele cu hepatosteatoză sau ficat gras (FL). Acest studiu a urmărit să determine dacă s-a stabilit o stare de SO hepatică în FL experimental cauzată de etionină la șoareci masculi adulți RMN și dacă funcția hepatică a fost modificată. Au fost utilizate două grupuri de 10 animale: unul martor și altul tratat cu DL-etionină intraperitoneal la 7,5 mg/20 g greutate corporală. Amploarea și caracteristicile FL au fost determinate histologic și cantitatea de depozit de grăsime hepatică a fost stabilită prin concentrația de trigliceride. Ambele analize au confirmat generarea de hepatosteatoză la bărbații injectați cu DL-etionină. Produsele provenite din degradarea lipoperoxidativă (diene conjugate (CD) și malondialdehidă (MDA), indicatori ai OS celular, au fost cuantificate spectrofotometric prin concentrația sa în omogenat hepatic. Deteriorarea funcției hepatice a fost măsurată prin niveluri plasmatice de alanină aminotransferază (ALT) și aspartat aminotransferază ( AST), folosind kituri comerciale. Inducerea FL a determinat o creștere semnificativă a CD de la 231,18 ± 15,53 µmol/mg proteină la 297,45 ± 23,10 mmol/mg proteină (P

Cuvinte cheie: ficat gras, etionină, stres oxidativ, disfuncție.

Stresul oxidativ (OE) este implicat în procesele inflamatorii, precum și în afecțiunile hepatice, se raportează concentrații mari de specii reactive de O2 (ROS) [18], iar originea afectării ficatului a fost legată de existența radicalilor liberi (RL) care poate lipoperoxidarea componentelor celulare, cum ar fi membranele, și poate provoca modificări care duc la pierderea funcției celulare. În NAFLD, funcția hepatică este afectată așa cum a fost determinat experimental [13]. Prezentul studiu a urmărit să determine dacă în HG experimental cauzat de etionină la șoareci albini de laborator (Mus musculus Linnaeus, 1758) RMN mascul mascul adult, s-a stabilit un statut EO în ficat, precum și să cuantifice posibila modificare a funcției a spus organul.

MATERIALE ȘI METODE

Pentru acest studiu, s-au utilizat șoareci masculi din populația șoarecilor albini de laborator, în special din tulpina NMRI, de la Centrul pentru animale al Universității Centroccidentale Lisandro Alvarado (UCLA), Venezuela. Prin eșantionare simplă aleatorie, 20 de șoareci masculi adulți cu o greutate corporală medie de 27,5 ± 1,5 grame (g) au fost selectați pe o scară animală Ohaus (Tripe Bean Balance, seria 700, Florham Park, NJ, SUA). cuști, în cicluri de lumină de 12 ore (h) de lumină/12 ore de întuneric în condițiile standardizate ale Bioteriumului Unității de cercetare în științe funcționale "Dr Haity Moussatchй" (UNIHM) Decanul de Științe UCLA Medicină Veterinară (DCV). Cu acces gratuit la apă și o hrană comercială pentru șoareci Ratarina® (Protinal, Venezuela). Studiul a fost realizat în conformitate cu Codul de bioetică și biosecuritate al FONACIT-Venezuela [10].

Inducerea HG nealcoolic:

Animalele au fost distribuite aleatoriu în două grupuri de câte 10 animale: un grup de control și altul injectat cu DL-etionină (Sigma Chemical Co., MO, SUA) dizolvate în soluție fiziologică sterilă, administrată i.p. în doze de 7,5 mg/20 g greutate corporală. Controalele au fost injectate doar cu vehiculul (soluție fiziologică sterilă). Ambele grupuri au fost supuse unui post de 48 de ore, cu acces gratuit la apă potabilă.

Eșantionare, determinări:

După 48 de ore de post, șoarecii, prin venipunctură coccigiană, au obținut o probă de sânge tratată cu acid etilendiamină tetraacetic (EDTA) -Na 2% anticoagulant. Plasmele au fost separate prin centrifugare (800 g, 20 4 minute) într-o microcentrifugă Eppendorf 5402 refrigerată (Brinkman Instr., NY, SUA) și au fost păstrate într-un frigider Mabe RMT, 41XMVEB (Columbia). Odată ce s-a obținut proba de sânge, animalele au fost eutanasiate sub anestezie ușoară cu eter. Ficatul a fost disecat, aspectul său macroscopic a fost evaluat și a fost plasat în 250 mM tampon Tris-zaharoză pH 7,2 la 4 ° C. 1,5 g de ficat s-au omogenizat cu o greutate de 3 ori mai mare în tampon Tris-zaharoză la 4 ° C într-un olar NSI-12 Bodine (Electric Comp., Chicago, SUA). Supernatantul omogenatului, diluat 1:40 cu apă deionizată, a fost menținut la frigider până la aplicarea analizelor respective.

Determinarea amplorii și caracteristicilor HG: O mică porțiune de ficat fixată în 10% formalină tamponată a fost utilizată pentru studiul său histopatologic efectuat în laboratorul de anatomie patologică al Spitalului veterinar „Dr. Humberto Ramnrez Daza ”de la DCV-UCLA. Secțiuni de 4 microni ale țesutului au fost obținute folosind un microtom Jung AG (Heidelberg, Germania) și colorarea ulterioară a secțiunilor cu hematoxilină-eozină conform tehnicii convenționale.

Cantitatea de depozit de grăsime hepatică: În supernatantul diluat al omogenatului hepatic, concentrația trigliceridelor a fost determinată prin metoda enzimatică utilizând un kit Qualitest (Ind. Qualitest, Caracas, Venezuela). Rezultatele au fost exprimate în miligrame (mg) de trigliceride/mg de proteine, care au fost determinate folosind setul Pierce (ILL, SUA) pe baza tehnicii Bradford [5].

Cuantificarea produselor de degradare lipoperoxidativă: În supernatantul omogenatului hepatic, s-a determinat concentrația dienelor conjugate (DC), prin tehnica descrisă de Wallin [22] și, de asemenea, concentrația de malondialdehidă (MDA) prin intermediul TBARS (reactanți cu acid barbituric 2-tio) conform Ohkawa [21].

Determinarea afectării funcției hepatice: În plasmă, activitatea alaninei aminotransferazei (ALT) și a aspartatului aminotransferazei (AST) au fost determinate folosind truse comerciale (laboratorul Wiener, Rosario, Argentina). Toate citirile spectrofotometrice au fost efectuate pe un Genesys 5 (NY, SUA).

Analiza statistică a rezultatelor: a fost realizată cu ajutorul software-ului statistic SPSS (pachetul statistic pentru științele sociale sau soluții statistice de produse și servicii) versiunea 17.0 pentru Windows. Rezultatele au fost exprimate ca medie a valorilor ± eroare standard. Pentru a stabili semnificația statistică a rezultatelor, s-a folosit testul „t” al Studentului, necesitând o certitudine de 95% (P REZULTATE ȘI DISCUȚIE

În FIG. 1A prezintă aspectul macroscopic al ficatului mascul de șoarece RMN adult controlat cu o nuanță închisă și în FIG. 1B ficatul unui animal injectat cu DL-etionină, care are o culoare deschisă spre deosebire de animalul martor. Studiul histologic al ficatului șoarecilor RMN masculi adulți martori a arătat celule hepatice cu aspect normal (FIG. 1C). Cu toate acestea, în ficatul șoarecilor tratați cu DL-etionină, s-a observat metamorfoză moderată a grăsimii hepatice, cu vacuole citoplasmatice mari și mici în hepatocite și prezența megalocitelor și a celulelor inelare sigilate (FIG. 1D).