Semnalizarea Tgf-β gbb indusă de o dietă bogată în grăsimi duce la rezistență la

indusă

  • Subiecte
  • rezumat
  • Introducere
  • Rezultate
  • Inducerea expresiei gbb imită fenotipurile HFD în Drosophila
  • Inhibarea semnalizării Gbb salvează obezitatea indusă de HFD și fenotipurile diabetice
  • tribble este o țintă din aval de semnalizare Gbb
  • tribble reglează negativ semnalizarea insulinei
  • inhibarea tribble suprimă obezitatea gbb iar fenotipul diabetic
  • Discuţie
  • Materiale și metode
  • Drosophila melanogaster stocuri
  • Cultură celulară, stimulare și transfecție.
  • HFD și putere
  • Măsurarea nivelului TG al corpului
  • Măsurarea nivelului de trehaloză/glucoză în hemolimfă
  • Purificarea ARN și analiza cantitativă RT-PCR
  • Cultură ex vivo de corpuri adulte adipoase
  • Western blot și imunocolorare
  • Chip
  • Luciferase Reporter Test in Cells Drosophila S2
  • analiza statistică
  • informatii suplimentare
  • Informatie suplimentara
  • Fișiere PDF
  • Informatie suplimentara
  • Comentarii

Subiecte

rezumat

Introducere

Muștele hrănite cu HFD au prezentat niveluri anormale de glucoză și lipide și rezistență la insulină similară cu cea observată la mamiferele obeze. Rezistența la insulină indusă de HFD a fost mediată de activitatea căii tribale Gbb în corpul gras. Prin urmare, inhibarea țintită a semnalizării tribale Gbb reprezintă o nouă strategie terapeutică pentru tratamentul obezității și a bolilor metabolice asociate acesteia.

Rezultate

Inducerea expresiei gbb imită fenotipurile HFD în Drosophila

În ziua 14 a HFD, am măsurat nivelurile de expresie a șapte liganzi ai superfamiliei TGF-β în corpul gras al muștei adulte. Dintre factorii pe care i-am testat, numai expresia gbb a fost semnificativ crescută prin hrănirea cu HFD (Fig. 1A), în special în corpul gras (Figura S2A). Apoi, am investigat dacă gbb ar putea modifica nivelurile de TG în corpul gras și trehaloza/glucoza în hemolimfă. Expresia excesivă a gbb în corpul adipos al adulților (DCG> gbb) a crescut nivelurile de TG și trehaloză/glucoză comparativ cu cele ale muștelor martor (DCG-Gal4/+) (Fig. 1B). Cu toate acestea, supraexprimarea gbb în intestin (NP3084> gbb) sau în mușchi (MHC> gbb) nu a modificat nivelul TG (Figura S2B). În plus, nivelul pAKT a fost semnificativ redus în gbb derivat din grăsimi (DCG> gbb), dar nu și în gbb derivat din intestin sau mușchi (Figura S2C).

Expresia excesivă a gbb în corpul adipos al adulților (pS106 GS> gbb + RU) a crescut semnificativ expresia Dilp2 și a crescut ușor expresia Dilp3 și Dilp5, în raport cu nivelurile din controalele -RU (Fig. 1E). Pentru a determina dacă gbb reglează semnalizarea insulinei, am disecat corpul adipos al adulților muștelor pS106 GS> gbb + RU sau -RU și le-am tratat cu insulină ex vivo (Figura S2E). Controalele -RU, tratamentul cu insulină ex vivo a crescut nivelul pAKT față de cel al probelor netratate. Dimpotrivă, în eșantioanele obținute din muște + RU, care au supraexprimat gbb în corpul adipos al adulților, tratamentul cu insulină ex vivo nu a crescut nivelul pAKT (Fig. 1F).

Pentru a investiga în continuare reglarea semnalizării insulinei de către gbb, am examinat localizarea subcelulară a dFOXO în corpurile de grăsime larvare utilizând controlerul specific de corp de grăsime DCG-Gal4. În aceste experimente, corpurile grase disecate au fost lipsite de ser și tratate cu insulină umană ex vivo. În corpul de control al foamei DCG-Gal4 și corpurile de grăsime DCG> gbb, dFOXO a fost localizat în principal în nuclee (Fig. 1G, I). După stimularea insulinei, aproape toată proteina dFOXO a fost mutată în citoplasmă în corpurile de grăsime de control DCG-Gal4 (Fig. 1H), în timp ce în corpurile de grăsime DCG> gbb majoritatea proteinei dFOXO era încă în nuclee (Fig. 1J). Aceste rezultate indică faptul că supraexpresia gbb în corpul adipos inhibă semnalizarea insulinei, rezultând un fenotip rezistent la insulină similar cu cel observat în timpul alimentării cu HFD pe termen lung.

Inhibarea semnalizării Gbb salvează obezitatea indusă de HFD și fenotipurile diabetice

( LA ) Nivelurile de trigliceride și trehaloză/glucoză din pS106 GS> trb + RU au crescut față de cele ale controalelor −RU. ( ) În starea HFD, scăderea trb în corpul adipos a suprimat niveluri ridicate de trigliceride și trehaloză/glucoză. ( C, D ) Eliminarea trb în corpul de grăsime care supraexprimă gbb (pS106 GS> gbb + trb RNAi + RU) a suprimat nivelurile crescute de trigliceride și trehaloză/glucoză observate în pS106 GS> gbb + RU. Datele sunt prezentate ca mijloace ± sem ale cel puțin trei experimente independente. * P 4, 5, care la rândul său provoacă boli secundare precum rezistența la insulină 6. În acest studiu, am demonstrat că obezitatea indusă de HFD declanșează semnalizarea TGF-β, care reglează în jos semnalizarea insulinei în corpul gras. De asemenea, demonstrăm rolul tribble, o nouă țintă a semnalizării TGF-β/Gbb, în ​​dezvoltarea rezistenței la insulină.