Pneumonectomia stângă combinată cu monocrotalină sau Sugen ca model de hipertensiune pulmonară în

rezumat

Pneumonectomia stângă a rozătoarelor este o tehnică valoroasă în investigarea hipertensiunii pulmonare. Aici, vă prezentăm un protocol pentru a descrie procedura de pneumonectomie a șobolanului și îngrijirea postoperatorie pentru morbiditate și mortalitate minime.

combinată

Abstract

Introducere

Hipertensiunea arterială pulmonară (HAP) este o boală progresivă și fatală caracterizată prin creșterea fluxului sanguin pulmonar, rezistență vasculară crescută, inflamație și remodelarea vaselor de sânge pulmonare mici. Această remodelare are ca rezultat, de obicei, leziuni vasculare care obstrucționează și șterg arterele pulmonare mici, provocând vasoconstricție și creșterea postîncărcării ventriculului drept 2. Există câteva tratamente medicamentoase de succes pentru HAP; în consecință, HAP rămâne mortalitate ridicată. Recent, accentul cercetării în patobiologia hipertensiunii pulmonare s-a îndreptat către un mecanism în care rolul creșterii fluxului sanguin pulmonar este considerat a fi un factor declanșator important în dezvoltarea remodelării angio-proliferării vasculare pulmonare 3, 4 .

Noutatea acestui manuscris este prezentată în protocolul chirurgical foarte detaliat și complet pentru pneumonectomia stângă la șobolani și în discuția provocărilor tehnice și fiziologice ale acestor modele. Deoarece acest protocol nu este disponibil în prezent, mulți cercetători consideră că modelul este prea dificil. Cercetătorii care au efectuat pneumonectomie stângă se confruntă cu rate ridicate de mortalitate și morbiditate asociate cu pierderea inutilă a animalelor, compromitând evaluarea științifică. În schimb, mulți folosesc modele clasice precum injecția MCT, hipoxia cronică sau pneumonectomia pentru a crea HAP. Cu toate acestea, aceste modele sunt mult mai puțin eficiente decât combinația MCT sau Sugen cu pneumonectomia stângă. Scopul principal al acestui articol este de a oferi primul protocol chirurgical detaliat și reproductibil pentru pneumonectomia stângă unilaterală la șobolani și de a oferi cel mai bun model chirurgical de HAP. Combinarea acestui protocol pentru pneumonectomia unilaterală stângă cu MCT sau SU5416 va permite cercetătorilor să creeze un model mult mai eficient și relevant din punct de vedere clinic de HAP severă pentru studierea patogeniei acestei boli fatale.

Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.

Protocol

Procedurile prezentate mai jos au fost aprobate de Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor (IACUC) al Școlii de Medicină Icahn din Muntele Sinai. Toți șobolanii care au primit îngrijire umană respectă „Ghidul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator” de pe Muntele Sinai.

1. pregătirea pentru operație

  1. Foarfece curbate pentru autoclavă Cooley-Mayo (foarfece mari), foarfece drepte Iris (foarfece mici), foarfece Vannas McPherson Iris (foarfece din spate), pensă țesut Wangensteen (forceps atraumatic), pensă țesut Gerald, speculă de sârmă simplă (retractor autoconservant), cauterizator pentru vase mici, tampoane de tifon, sondă dublă, suport de ac vascular fin și pensă hemostatică Jacobson Micro țânțar (țânțar).

2. pregătirea și intubația șobolanilor

3. pregătirea sterilă a mediului

  1. Vizualizați zona chirurgicală la microscop. Acest lucru trebuie făcut mai întâi, deoarece microscopul nu poate fi reglat după ce mediul este steril.
  2. Puneți mănuși chirurgicale sterile. Nu atingeți altceva decât instrumentele sterile, draperiile chirurgicale și zona chirurgicală a corpului șobolanului!.
  3. Așezați un drap steril peste corpul șobolanului și pe tava instrumentului pentru a crea un mediu steril.
  4. Purtând mănuși sterile, așezați instrumentele sterile pe tava pentru instrumente sterile.

4. Procedură chirurgicală stângă Pneumonectomie

5. recuperarea postoperatorie

  1. Așezați animalul într-o poziție sternală. Opriți izofluranul, dar continuați să dați oxigenului șobolanului prin tubul endotraheal. Nu lăsați animalul nesupravegheat în niciun moment până nu ați recăpătat suficientă conștiință pentru a merge și animalul în cușca sa.
  2. Se administrează 2-3 ml soluție Ringer încălzită steril subcutanat.
  3. Monitorizați ritmul cardiac (≈200 - 500 bpm), saturația oxigenului (≥95%) și culoarea animalului pentru a confirma că animalul respiră bine.
  4. Când animalul începe să facă mișcări de respirație spontană și mișcări ale gâtului și răspunde la stimuli fizici (cum ar fi ochii lărgiți, mișcarea nasului și a urechilor care răspund la sunet), extubați animalul trăgând tubul și deconectați ventilatorul.
  5. Întoarceți animalele într-o cușcă goală, în compania altor animale. Animalul trebuie să fie singur cel puțin 3 zile.
  6. Pentru a controla durerea, administrați buprenorfină 0,1 mg/kg subcutanat la fiecare 12 ore timp de 3 zile.

6. Administrarea MCT sau Sugen "Second Hit"

  1. Se administrează 1 ml de MCT (60 mg/kg) sau 1 ml de Sugen (25 mg/kg) subcutanat, la o săptămână după operație.

7. terminal de recoltare

Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.

Rezultate reprezentative

Conform sistemului de clasificare acceptat, hipertensiunea pulmonară este caracterizată printr-o presiune medie a arterei pulmonare (MAPP) mai mare decât limitele superioare ale presiunii normale a arterei pulmonare (adică 25 mm Hg). În grupul pneumonectomie + MCT, HAP severă s-a dezvoltat până în ziua 21 cu un PAPM mai mare (Figura 1). MPAP este calculat prin formula: