Disfuncție vasculară perivasculară mediată de grăsime și remodelare prin calea ampk mtor în

disfuncție

  • Subiecte
  • rezumat
  • Introducere
  • Metode
  • Produse chimice
  • Animale
  • Testul reactivității vasculare aortice
  • Test de reactivitate vasculară mezenterică
  • Cultură de celule
  • Western blot
  • Histologie
  • Statistici
  • Rezultate
  • Efectele PVAT asupra reactivității aortice
  • Efectul PVAT asupra reactivității arterei mezenterice
  • HFD reduce activitatea eNOS
  • Remodelarea aortelor și PVAT la șobolani într-un HFD
  • Expresia AMPK și mTOR la ​​aortele de șobolan într-un HFD
  • Efectul PVAT asupra expresiei AMPK/mTOR în VSMC cultivat
  • Discuţie

Subiecte

  • Semnalizare celulară
  • Grăsimi
  • Obezitatea
  • Boli vasculare

rezumat

Metode

Produse chimice

Fenilefrina (PE), acetilcolina (ACh) și nitroglicerina (NTG) au fost achiziționate de la Sigma-Aldrich (Taufkirchen, Germania).

Animale

Șobolani Wistar masculi, în vârstă de 6 până la 8 săptămâni, au fost obținuți de la Charles River (Sulzfeld, Germania). Șobolanii au fost adăpostiți în condiții de 12/12 h zi/noapte și tuturor animalelor li s-a dat hrană și apă ad libitum. Comitetul local de îngrijire și utilizare a animalelor a aprobat toate procedurile de îngrijire și utilizare a animalelor. Cercetarea este conformă cu Ghidul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator publicat de Institutul Național de Sănătate al SUA (publicația NIH nr. 85-23, revizuită în 1996). Animalele au primit dieta alimentară standard (grup de control, n = 18) sau un HFD (grup HFD, n = 18) timp de 6 luni.

Testul reactivității vasculare aortice

Test de reactivitate vasculară mezenterică

Cultură de celule

VSMC au fost obținute din aortele toracice de șobolan și cultivate folosind metoda explantului tisular așa cum a fost descrisă anterior de grupul nostru. Au fost obținute 27 de adipocite perivasculară din țesutul adipos periaortic și cultivate folosind metoda explantului tisular, așa cum este descris mai sus. 28 de coculturi VSMC/adipocite au fost stabilite în prezența sau absența compusului C 10 μM, un inhibitor AMPK (Calbiochem, San Diego, CA, SUA), așa cum s-a descris anterior pe laturile opuse ale culturii inserții plastice de polietilen tereftalat poros, o zonă de cultură eficientă de 0,3 cm 2, o dimensiune a porilor de 0,4 μm și o densitate a porilor de 1 × 108 pe cm 2 (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, SUA).).

Western blot

Histologie

Grosimea tunicii aortice a fost determinată conform tehnicilor stabilite. 29 Țesutul aortic a fost fixat în soluție salină tamponată 10% formaldehidă/fosfat și încorporat în parafină. În urma procedurilor histologice de rutină, secțiunile transversale proximale ale primei artere intercostale au fost colorate cu Victoria Blue și Ponceau S și studiate la mărire × 200. Imaginile au fost obținute cu o cameră digitală folosind un microscop Nikon TE2000 (Nikon Corporation, Tokyo Japonia). Mediul tunica a fost definit ca regiunea dintre lamele elastice interne și externe, care au fost măsurate în patru puncte ortogonale ale secțiunilor arteriale în timpul a trei inele aortice consecutive per animal folosind software-ul de imagistică NIS-Elements 3.0 (Nikon Corporation).

Mărimea adipocitelor periaortice a fost măsurată așa cum s-a descris anterior. 30 de țesuturi adipoase periaortice au fost colectate de la șase șobolani, fixate cu formalină tamponată 10%, încorporate în parafină și colorate cu hematoxilină și eozină. Imaginile au fost capturate folosind un microscop Nikon TE2000 (Nikon Corporation), iar aria pentru un total de 100 de adipocite luate de la fiecare șobolan a fost determinată folosind software-ul de imagistică NIS-Elements 3.0 (Nikon Corporation).

Statistici

Datele sunt medii ± sem. Concentrația agonistă efectivă pe jumătate maximă (EC50) și răspunsul maxim (E max) au fost calculate din curbele individuale de concentrație-răspuns agonist folosind GraphPad Prism 3.0 (San Diego, CA, SUA). Diferențele statistice în valorile medii au fost evaluate utilizând testul t Student sau analiza unică a varianței cu testele post-hoc de comparație multiplă Bonferroni, după caz. Valorile P bilaterale sub 0,05 au fost considerate semnificative statistic.