DIAGN; STICO DE Helicobacter spp
Aprobare: 11 octombrie 2017
Cuvinte cheie: stomac, gastroscopie, test de respirație, ulcer.
Rezumat: Sindromul gastric ulcerativ ecvin (EGUS) este o entitate multifactorială care produce leziuni ale mucoasei gastrice. EGUS a fost asociat cu factori de risc cum ar fi stabilizarea, furnizarea de cereale, exerciții fizice cauzate de hipergastrinemie, stres, medicamente antiinflamatoare nesteroidiene (AINS) și disbioză (Helicobacter spp.). Obiectivul acestui studiu a fost detectarea Helicobacter spp. pe mucoasa gastrică ecvină și pentru a determina asocierea acesteia cu EGUS. Au fost evaluați douăzeci de cai cu rase diferite, ambele sexe, stabilite. Au fost efectuate o esofag-gastro-duodenoscopie și biopsia mucoasei glandulare. Probele au fost supuse testului rapid Urease (URT), iar testul de respirație a ureei (UBT) a fost efectuat la populația studiată. Au fost elaborate statistici descriptive și test de sensibilitate/specificitate. Testele de producție a ureei au fost mai puțin sensibile în ceea ce privește testul "standard de aur" (agar uree); Nu a fost posibil să se determine corespondența dintre testele de uree și prezența Helicobacter spp sau EGUS. Nu s-a stabilit corespondența dintre teste și EGUS sau Helicobacter spp., Necesită diagnostic molecular.
Cuvinte cheie: stomac, gastroscopie, test de respirație cu uree, ulcer.
Helicobacter este o bacterie gram negativă, microaerofilă, spirală, flagelată, clasificată inițial în genul Campylobacter, dar reclasificată în 1989 [14], grație studiului detaliat al unui microorganism găsit în antrul piloric al oamenilor cu boală gastrică, numit de atunci Helicobacter pylori. Deși forma sa cea mai cunoscută este spirala, aceasta este pleomorfă. Formele de sferă (coccoizi) apar în condiții de privare de nutrienți, expunere la antibiotice sau perioade lungi de incubație. Se presupune că aceste forme revin la prezentarea bacilară în funcție de condițiile speciale de mediu, revenindu-și capacitatea infecțioasă [1, 14].
Cel mai cunoscut profil biochimic din genul Helicobacter este cel al H. pylori, a cărui activitate enzimatică cea mai notabilă este capacitatea de a hidroliza ureea, precum și de a avea activitate de fosfatază alcalină, oxidază și catalază. Deși activitatea ureazei este considerată relativ frecventă în rândul speciilor Helicobacter, unele dintre aceste bacterii găsite în mucoasa gastrică a animalelor diferă prin activitatea lor enzimatică și efectele asupra țesuturilor.
Unele microorganisme găsite în mucoasa gastrică a equinelor (Equus ferus caballus), atât sănătoase, cât și ulcerate, au fost legate de genul Helicobacter [3, 7, 8, 16], printre care H. equorum [12]; Cu toate acestea, participarea Helicobacter la patogeneza sindromului ulcerativ gastric ecvin (EGG) nu a fost încă stabilită, deși există prezumția că prezența sa în mucoasa gastrică a cailor este un factor de risc potențial pentru sindromul în cauză. Din acest motiv, studiul de față a avut ca scop detectarea bacteriilor prin teste de activitate a ureazei, pe lângă stabilirea asocierii dintre SUGE și prezența acesteia.
MATERIALE ȘI METODE
Tipul de studiu și aspectele etice
Un studiu descriptiv, prospectiv, transversal a fost realizat prin eșantionare convențională. Studiul a fost aprobat de Comitetul instituțional pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de la Universitatea din Antioquia prin protocolul 3082013.
Esofag - gastro - duodenoscopie
Gastro-duodenoscopia a fost efectuată, după post timp de douăsprezece și patru ore (h) pentru alimentele solide și respectiv lichide. A fost efectuată sedarea cu 10% xilazină (Anased®, Lloyd Laboratories, Iowa, SUA) (0,5 mg/kg/IV). Ulterior, endoscopia a fost efectuată utilizând un sistem de endoscop video (PortaScope®, 1800PVS, Bradenton, FL, SUA). Rezultatele macroscopice au fost clasificate în funcție de scara de clasificare a gradului de leziuni gastrice propuse de MacAllister și colab. [unsprezece].
În timpul turului de endoscop, apa a fost instilată pentru a îmbunătăți vizualizarea mucoasei gastrice. Odată ce evaluarea gastroscopică și clasificarea leziunilor au fost efectuate, au fost prelevate trei biopsii de pe suprafața gastrică, mucoasa glandulară (fundul) și antrul piloric, prin inserția unei forcepte trans-endoscopice flexibile (PortaScope®, 1800PVS, Bradenton, FL, SUA), pentru efectuarea testelor rapide de uree (PRU).
Test rapid de uree (PRU)
Pentru realizarea PRU, a fost pregătit un bulion de uree modificat [13], compus din 500 ml apă distilată; 100% uree (Merck, Darnstadt, Germania) 10g; roșu fenol 0,005g; 97% acid clorhidric 0,2 ml; pH-ul rezultat a fost 7, măsurat printr-o bandă indicatoare de pH. Bulionul a fost alicotat în volume de 0,5 ml și depus în crioviale de 2 ml, fiecare biopsie luată a fost complet scufundată în bulion și marcată. Probele din bulion au fost incubate la temperatura camerei timp de 12 ore pentru citire ulterioară.
Reacția cu urează a avut la bază un mediu bogat în uree care conținea și un indicator de pH (roșu fenol). Când s-a scufundat o sursă de enzimă urează (în acest caz microorganisme cu activitate de uree), aceasta era însărcinată cu hidrolizarea ureei prezente în mediu; eliberarea de amoniu și dioxid de carbon rezultată din reacție a alcalinizat mediul și a produs o schimbare de culoare de la galben (negativ) la roșu-fuchsia intens, indicând o reacție pozitivă la activitatea ureazei (FIG. 1).
Douăzeci de probe de mucoasă glandulară au fost prelevate în dublu exemplar pentru a fi supuse bulionului de uree și agarului de uree („testul aurului”), utilizate în laboratorul de microbiologie veterinară al Facultății de Științe Agrare a Universității din Antioquia, pentru a valida rezultatul dintre ambele. mass-media. Agarul de uree a fost compus dintr-un gel de bază (Urea agar Base Christensen® Merck Millipore, MA, SUA) 3,6 g, sare de uree (Carlo Erba Reagents SAS, Chaussée du Vexin, FR) 7,5 g și 5 picături de acid clorhidric 97% . Pentru a valida eficacitatea bulionului, s-a folosit un inocul al unui microorganism cu activitate pozitivă a ureazei (Proteus spp.).
Test de respirație (Urea Breath Test - UBT)
A fost luată respirația bazală a fiecărui ecvin, introducând un tub de sticlă (Exetainer® Flacon pentru testarea respirației 13C, Labco limited, Marea Britanie) într-o nară, în timp ce cea contralaterală a fost simultan ocluzită, la expirarea ecvinului, tubul a fost închis imediat. Ulterior, fiecărui individ i s-au administrat 50 mg de uree C13 (Lot U23001) diluat în 5 ml de apă și aplicat direct împotriva mucoasei gastrice prin canalul de lucru al sondei endoscopice. Apoi, la 10 minute după alimentarea cu reactiv, a fost luată o a doua respirație (expirație) într-o altă sticlă de sticlă. Fiecare tub a fost citit pe un spectrometru de masă cu raport de izotopi (ABCA2 Automated Breath CO2 Analyzer, Sercon® limited, UK). Rezultatul care a evidențiat un raport de gaz mai mare de 2Δ (delta) a fost considerat pozitiv. Reacția chimică așteptată este reprezentată în următoarea ecuație: 13 CO (NH2) + H2O → 2 NH 3 + 13 CO2
Analiza statistică (sensibilitatea și specificitatea testelor de diagnostic)
Pentru a determina capacitatea testelor de diagnostic de a detecta reacțiile pozitive ale ureazei, a fost efectuată o comparație a curbelor ROC (curba caracteristică de funcționare a receptorului) între PRU, UBT și urea agar („testul de aur”). Această analiză a fost efectuată cu software-ul EPIDAT® V 3.1.
REZULTATE SI DISCUTII
Nu s-a evidențiat nicio distanță semnificativă între linia standard (diagonală) și curbele PRU și UBT evaluate (FIG. 2), ceea ce a indicat că rezultatele sunt atribuite întâmplării și nu corespondenței cu testul de aur (Chi test 2 = 0,1728; Valoarea P = 0,6777). Analiza curbei ROC a arătat că nici PRU, nici UBT nu sunt sensibili la detectarea activității ureazei (TABELUL I) în comparație cu testul de aur.