Cadherin-17 este un marker de diagnostic util pentru adenocarcinoamele sistemului digestiv -

cadherin-17

  • rezumat
  • Principal
  • Materiale și metode
  • Probele de țesut
  • Matrici de țesuturi
  • Analiza Western Blot
  • Colorarea imunohistochimică
  • Rezultate
  • Discuţie

rezumat

Principal

Cancerul unui site primar necunoscut este al șaptelea până la al optulea cel mai frecvent cancer întâlnit în practica clinică. 1 Incidența anuală ajustată în funcție de vârstă la 100.000 de populații este de 7 până la 12 cazuri în Statele Unite, 18 în Australia și 6 în Olanda. Este a patra cauză cea mai frecventă de deces prin cancer atât la bărbați, cât și la femei. 2 Deoarece tratamentul optim al cancerului este legat de locul tumorii primare, lipsa identificării locului primar cauzează probleme considerabile în timpul tratamentului pacienților. Adenocarcinoamele reprezintă aproape jumătate din toate cazurile de cancer primare necunoscute. Utilizarea imunohistochimiei pentru detectarea antigenelor specifice pe celulele tumorale a dus la o îmbunătățire semnificativă a diagnosticului de cancer. De exemplu, antigenul specific prostatei este utilizat ca marker pentru cancerul de prostată. 3 Factorul de transcripție tiroidiană este un marker pentru cancerul pulmonar. 4 Cu toate acestea, lipsește încă un bun marker pentru tumorile gastrointestinale (GI).

Cadherina-17, numită și caderină hepatică-intestinală sau transportor-1 de peptide umane, este un membru al superfamiliei cadherinei și este o moleculă de adeziune celulă-celulă dependentă de Ca2 +. 5, 6 Spre deosebire de așa-numitele cadherine clasice, cum ar fi E, N și P cadherine, cadherin-17 are șapte repetări de cadherin în loc de cinci în domeniul extracelular și doar 20 de reziduuri de aminoacizi în domeniul citoplasmatic. Domeniul citoplasmatic marcat de scurt este lipsit de omologie cu alte caderine, iar funcția adezivă a caderinei-17 nu depinde de asocierea cu alte proteine ​​citoplasmatice. 7 Distribuția subcelulară a caderinei-17 este, de asemenea, diferită de caderinele clasice. În celulele epiteliale intestinale, E-cadherina este concentrată în joncțiunile aderente, în timp ce cadherina-17 este distribuită uniform de-a lungul zonei de contact laterale. 8

Distribuția tisulară a cadherinei-17 diferă în funcție de specie. La șobolan, cadherina-17 este exprimată în ficat și celule epiteliale intestinale. La om și șoareci, expresia este limitată la celulele epiteliale intestinale și nu se găsește în ficat. 9 Distribuția limitată a 17-cadherinei în țesuturile normale sugerează că aceasta poate fi un marker util pentru identificarea siturilor tumorale primare. S-a raportat că cadherina-17 este exprimată în cancerele colorectale, 10 gastrice, 11, 12 și pancreatice. 13 Nu se știe dacă este exprimat în tumori din alte organe.

În consecință, în acest studiu, am examinat expresia cadherinei-17 în tumorile derivate din diferite locuri din corp folosind matrici de țesut. Am constatat că cadherina-17 a fost exprimată în mod difuz și puternic în adenocarcinoame colorectale, împrăștiate exprimate în adenocarcinoame ale stomacului, pancreasului și căilor biliare și practic neexprimată în tumorile din alte părți ale corpului. Studiul nostru indică faptul că cadherina-17 poate fi un marker util pentru identificarea siturilor primare ale adenocarcinoamelor metastatice.

Materiale și metode

Probele de țesut

Blocuri de țesut fixat în formalin, încorporate în parafină, au fost obținute din 518 carcinoame primare caracterizate anterior și 60 de țesuturi non-tumorale din arhivele Departamentului de Patologie, Spitalul Național al Universității din Taiwan. Studiul a fost realizat în conformitate cu liniile directoare ale comisiei noastre de revizuire instituțională. Aceste cazuri tumorale au inclus 44 de cancere de sân, 39 de carcinoame de col uterin, 33 de colangiocarcinoame, 47 de cancere colorectale, 57 de carcinoame hepatocelulare, 50 de cancer pulmonar, 47 de carcinoame cu celule renale, 89 de cancer ovarian, 28 de cancer pancreatic, 39 de cancer renal. cancere Spectrul țesutului non-tumoral examinat este listat în Tabelul 1.

Masă completă

Matrici de țesuturi

Zonele țesuturilor vizate au fost marcate pe secțiunile colorate cu H și E. Un miez de țesut de 2 mm a fost îndepărtat pentru fiecare caz folosind un dispozitiv manual cu matrice tisulară (Beecher Instruments, Silver Spring, MD, SUA) și a fost introdus într-un bloc de parafină receptor. Țesuturile combinate au fost tăiate în felii groase de 4 μm și plasate pe lamele încărcate pozitiv.

Analiza Western Blot

Western bloturile au fost efectuate pe lizate proteice din 11 țesuturi normale și tumorale reprezentative, incluzând rinichi, ficat, colon, intestin subțire, stomac, splină, tiroidă, pancreas, placentă și carcinoame ovariene și pulmonare. Cantități similare de proteine ​​totale din fiecare lizat au fost separate folosind geluri de poliscrilamidă Tris-glicină-SDS-8% (Novex, San Diego, CA, SUA), și apoi transferate în membranele de difluorură Impobilon-P poliviniliden cu Millipore. Membranele au fost sondate cu anticorp monoclonal anti-caderină-17 de șoarece, clona 1H3 (IgG1), la o concentrație de 1 μg/ml (Abnova, Taipei, Taiwan) urmată de o imunoglobulină anti-șoarece de capră conjugată cu peroxidază (1: 2500 ). Western blots au fost dezvoltate folosind chemiluminiscență (Pierce, Rockford, IL, SUA).

Colorarea imunohistochimică

Secțiunile de țesut au fost deparafinizate și rehidratate. Recuperarea antigenului a fost efectuată prin incubarea lamelelor în tampon de acid citric 0,01 M (pH 6,0) la 100 ° C timp de 10 min. După blocarea cu 3% H2O2 și 5% ser bovin fetal, lamele au reacționat cu un anticorp monoclonal împotriva caderinei-17 (clona 1H3, Abnova), citokeratinei 7 (DakoCytomation, Glostrup, Danemarca), citokeratinei 20 (DakoCytomation) sau CDX -2 (Biogenix, San Ramon, CA, SUA) la o diluție de 1: 100 la 4 ° C peste noapte. Lamelele au fost incubate cu reactiv polimer-HRP (BioGenex). Activitatea peroxidazei a fost vizualizată cu o soluție de tetrahidroxiclorură de diaminobenzidină (BioGenex). Secțiunile au fost contracolorate cu hematoxilină. Colorarea membranoasă maro închis a fost definită ca pozitivă și nici o colorare nu a fost definită ca negativă. Pentru controalele negative, am înlocuit anticorpul primar cu 5% ser bovin fetal. Colorarea a fost marcată după cum urmează: 0 (fără colorare detectabilă); 1+ (75%). În celulele cu colorare pozitivă, colorarea a fost intensă și uniformă, prin urmare intensitatea nu a fost luată în considerare în scor.