Urbina Wines Blog Metode de clasificare a drojdiilor
Luni, 3 ianuarie 2011
Metode de clasificare a drojdiei
CARACTERISTICI UTILIZATE ÎN CLASIFICAREA DRASTURII
- Aspectul microscopic al celulelor.
- Mod de reproducere sexuală.
- Caracteristici fiziologice (în special nutriționale).
- Caracteristici biochimice.
- Comparația genomilor prin reasocierea ADN-ADN sau ADN-ARN
Taxonomie: studiu de clasificare și identificare.
Clasificare: gruparea organismelor într-un taxon (taxon) în funcție de asemănările sau relațiile lor ancestrale, sau ambele.
Identificare: Comparație între o tulpină necunoscută și una cunoscută similară.
Nomenclatură: numele unui taxon acceptat.
ASPECT MICROSCOPIC
Dimensiunea celulei.
Forma: Forma celulelor indică modul de reproducere vegetativă.
Formarea filamentului
Reproducere sexuală Structura și forma ascosporilor și teliosporilor
CARACTERISTICI FIZIOLOGICE
Capacitatea de a fermenta anumite zaharuri (test de fermentare).
Creșterea aerobă cu diverși compuși (teste de asimilare) fiecare ca sursă unică de carbon sau azot.
Clivaj arbutinic.
CARACTERISTICI TEHNOLOGICE
Studiul puterii de fermentare.
Temperatura de incubație pentru testele de taxonomie este de 25 ° C, deși optimul pentru unele drojdii este mai mare și pentru altele mai scăzut.
METODE DE CLASIFICARE A DRASTURILOR
Metoda: Sporularea este cauzată de cultivarea drojdiilor într-un mediu favorabil (mediu de presporulare), bogat în glucoză, în care acestea rămân o perioadă de 48 de ore la 28 ° C. După acest timp, acestea sunt însămânțate într-un mediu de sporulare (mediu de sporificare) sărac în glucoză, pentru a reduce cât mai mult posibil reproducerea vegetativă și completate cu o substanță care induce sporulația, cum ar fi acetat. În ultimul mediu, vor fi păstrate timp de 3 până la 5 zile la o temperatură de 25 ° C. După această perioadă de incubație, se fac preparate proaspete urmate de observare microscopică, observându-se prezența sau absența sporilor, precum și mărimea acestora. Pentru a facilita această observație, colorarea sporilor se poate face în cazuri îndoielnice.
În cazurile de sporulare negativă, culturile vor fi menținute la temperatura camerei și examinate săptămânal timp de minimum 4 până la 6 săptămâni.
Compoziția mass-media:
Mediul de presporulare
Glucoza 50 g
Extract de drojdie 10 g
Nutryent-Bulion (Difco) 30 g
Acetat de potasiu
Agar 20 g
Apă 1000 ml
Mediu de sporificare:
Glucoza 1 g
Extract de drojdie 2,5 g
Bulion de nutrienți (Difco)
Acetat de potasiu 9,8 g
Agar 20 g
Apă 1000 ml
Înainte de tub, mediul trebuie topit deoarece conține agar.
Sterilizarea mass-media se face într-o autoclavă, o atmosferă timp de 15 minute.
Puterea de fermentare este măsura procentului (V/V) de etanol pe care o tulpină de drojdie este capabilă să îl producă.
Acest test a fost conceput inițial de Hayduck și descris de Hericstoth și Osztrovsky în 1927. Se bazează pe determinarea, prin pierderea în greutate, a dioxidului de carbon care este eliberat în timpul fermentației alcoolice, în conformitate cu ecuația stoichiometrică:
C2H12 06 ——-———— 2 CO2 + 2 CH3-CH2OH
Metodă: Pentru a determina puterea de fermentare, mustul de struguri Beaumé de 12 ° se prepară din must concentrat, ajustând pH-ul la 5 cu soluții de hidroxid de sodiu sau acid clorhidric.
Mediul astfel preparat este distribuit în baloane Erlenmeyer de 100 ml. capacitate, punând câte 50 ml mediu în fiecare. Acestea sunt sterilizate într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.
Semănatul se efectuează cu un mâner de platină din culturi tinere-, odată ce mustul este semănat, baloanele sunt închise cu dopuri din cauciuc prevăzute cu supape Müller cu acid sulfuric concentrat. Aceste supape permit ieșirea dioxidului de carbon și împiedică intrarea aerului.
După însămânțare, baloanele sunt cântărite și incubate la 25 ° C. până la greutate constantă.
Diferența de greutate rezultată la sfârșitul procesului va indica dioxidul de carbon eliberat, care înmulțit cu un factor stabilit dă direct valoarea etanolului format în procente (V/V).
Calculul factorilor:
La fermentarea a 180 g de glucoză produc 88 g de dioxid de carbon și 92 de etanol; prin urmare, un gram de CO2 corespunde la 1,04 g de etanol. Deoarece densitatea etanolului este de 0,79, 1,04 g corespunde unui volum de 1,3 ce Prin urmare 1 g de CO2 corespunde 1,3 ce de etanol.
Diferența de greutate în grame înmulțită cu 1,3 dă volumul de etanol produs.
Volumul mustului ———————— 1,3 x pierdere în greutate = g etanol
100 ————————————————— PF
Volumul mustului a fost de 50 ml. curând:
PF = 100 x 1,3 x pierderea în greutate în grame: 50
P.F. = 2,6 x pierderea în greutate în grame.
În practică, se înmulțește cu 2,5, deoarece randamentul nu este de 100.
Rezultatul acestui test oferă informații importante cu privire la identitatea tulpinei studiate.
Taxonomiștii nu iau în considerare acest test, cu toate acestea, în Institutul de fermentații industriale, s-a observat că acest test determină rapid genul și, în cadrul acestuia, în unele cazuri din genul Saccharomyces permite distincția între diferite specii. Neincluderea acestui test se poate datora faptului că mustul de struguri nu este în principal sursa studiului drojdiei, așa cum se întâmplă în acest Institut aproape de la origini.
FORMAREA RAMURILOR PSEUDOMICELIARE
Metodă: O hârtie absorbantă este plasată într-o cutie Petri și o tijă de sticlă îndoită este așezată deasupra, pe care este așezată o lamă. Setul este sterilizat într-un cuptor la temperatura de 120 ° C timp de 3 ore. Odată sterile și funcționând în condiții aseptice, câteva picături de agar steril malț topit sunt aplicate pe lamă pentru a forma o peliculă subțire. Când mediul este solid, este însămânțat dintr-o cultură tânără (48 de ore pe agar de malț) cu sârmă de platină, făcând o dungă longitudinală și câteva linii transversale foarte ușoare. Apa sterilă este turnată pe hârtie pentru a menține un grad ridicat de umiditate în interiorul plăcii.