SINDY NATHALY NICOLA BENAVIDES - PDF Descărcare gratuită
TIPIFICAREA VIRUSULUI HPV PAPILOMA UMANĂ ȘI RELAȚIA SA CU CARACTERISTICILE POPULAȚIEI ȘI Vătămările în cancerul gâtului uterin la femeile din MUNICIPIUL PASTO SINDY NATHALY NICOLA BENAVIDES UNIVERSIDAD DE NARIÑO DE SANARIA DE NARIÑO DE SANARI
TIPIFICAREA VIRUSULUI HPV PAPILOMA UMANĂ ȘI RELAȚIA SA CU CARACTERISTICILE POPULAȚIEI ȘI Vătămările în cancerul de gât uterin la femeile din MUNICIPIUL PASTO SINDY NATHALY NICOLA BENAVIDES Proiect de licență GUERRÓ GUERRÓ GUERRÓ GUERRÓ GUERRÓ GUERRÓ GUERRÓ BIOR. MSc. Științe Microbiologie UNIVERSITATEA DIN NARIÑO FACULTATEA DE ȘTIINȚE EXACTE ȘI NATURALE DEPARTAMENTUL DE BIOLOGIE SAN JUAN DE PASTO 2014 2
Ideile și concluziile furnizate în lucrarea de grad sunt responsabilitățile exclusive ale autorului. Articolul 1 Nº 324 din 11 octombrie 1966 emis de Onorabilul Consiliu Directiv Superior al Universității din Nariño. 3
Notă de acceptare Milena Guerrero Flórez Regizor Dolly Margot Revelo Romo Jurado Edith Mariela Burbano Rosero Jurado San Juan de Pasto, mai 2014. 4
Colegilor mei Juan Pablo, Vanessa, Diana, Nixon, Carlos, Carolina, Mario, Juan Gustavo, Marcela, Christian pentru compania lor. Vă mulțumesc mult tuturor. 6
DEDICARE Pentru tine Doamne, pentru că mi-ai dat puterea, energia și dragostea pentru a finaliza această investigație. Părinților mei José Nicola și Cecilia Benavides, fraților mei Ricardo, Diana, David și Mauricio care mereu m-au susținut și au crezut în mine, oferindu-mi dragostea și înțelegerea lor. Colegilor mei pentru tot ajutorul lor, cuvinte de sprijin, sfaturi și energie bună. 7
CUPRINS INTRODUCERE. 23 1. OBIECTIVE. 26 1.1 OBIECTIV GENERAL. 26 1.2 OBIECTIVE SPECIFICE. 26 2. STADIUL ART. 27 2.1 VIRUSUL PAPILOMULUI UMAN - HPV. 27 2.1.1 Tipuri și clasificare HPV. 27 2.1.2 Genomul și structura HPV. 29 2.1.3 Descrierea regiunilor genomului HPV. 30 2.1.4 Regiunea expresiei tardive L1 și L2. 31 2.1.5 Variante ale virusului papiloma uman. 32 2.2 HPV și cancerul de col uterin. 33 2.3 Istoria naturală a CCU. 36 2.4 Detectarea și tipizarea moleculară a HPV. 38 2.5 Factori de risc în CCU. 41 2.5.1 Numărul de parteneri sexuali. 41 2.5.2 Vârsta inițierii actului sexual. 41 2.5.3 Utilizarea contraceptivelor orale. 42 2.5.4 Infecția cu alte organisme. 42 2.5.5 Fumatul. 43 8
2.5.6 Numărul de sarcini. 43 2,5 7 Citologie convențională. 44 3. METODOLOGIE. 46 3.1 Descrierea populației studiate. 46 3.1.1 Considerații etice. 47 3.1.2 Criterii de includere. 47 3.1.3 Criterii de excludere. 47 3.1.4 Variabile de populație luate în considerare în studiu. 47 3.1.5 Dimensiunea probei. 47 3.2 Înregistrarea informațiilor, includerea probelor, transportul și conservarea. 47 3.2.1 Registrul de informare a populației. 47 3.2.2 Analiza univariată. 48 3.2.3 Includerea probelor. 48 3.3 Prelucrarea probelor pentru tiparea moleculară HPV. 48 3.4 Analiza calității probelor prin β-globină PCR. 49 Pregătirea probelor pentru analiza calității. 49 3.4.1 Evaluarea calității eșantionului prin amplificare PCR/HHB. 49 3.4.2 Verificarea produselor PCR/HHB prin electroforeză pe gel de agaroză. 51 3.4.3 Interpretarea rezultatelor PCR/HHB. 51 3.5 Detectarea și tipizarea moleculară a HPV. 51 3.5.1 Tastarea prin ștergere linie inversă. 52 3.5.2 PCR-L1 GP5 +/GP6 + și secvențierea ADN-ului. 56 9
4.3.1 Caracteristicile populației femeilor cu citologie (-), ASCUS și infecție cu HPV. 87 4.3.1.1 Caracteristicile sociodemografice și infecția cu HPV. 87 4.3.1.1.1 Vârsta și infecția cu HPV. 88 4.3.1.1.2 Numărul partenerilor sexuali și infecția cu HPV. 89 4.3.1.2 Caracteristici gineco-obstetricale și infecție cu HPV. 91 4.3.1.2.1 Metoda de planificare și infecția cu HPV. 92 4.3.1.2.2 Alte organisme și infecția cu HPV. 93 4.3.1.3 Modificări celulare reactive asociate cu inflamația și infecția cu HPV. 93 4.3.2 Analiza femeilor cu leziuni LIEBG, LIEAG, CCU și infecție cu HPV. 94 4.3.2.1 Vârsta femeilor cu infecție cu LIEBG, LIEAG și CCU și HPV. 94 4.3.2.2 LIEBG, LIEAG, leziuni CCU și infecție cu HPV. 96 4.3.2.3 LIEBG, LIEAG, leziuni CCU și tipuri de HPV. 100 CONCLUZII. 102 RECOMANDĂRI. 104 BIBLIOGRAFIE. 105 ANEXE. 127 11
Tabelul 23. Frecvența infecției cu HPV în funcție de vârsta femeilor cu LIEBG, LIEAG și CCU. 95 Tabelul 24. Frecvențele infecției cu HPV la femeile cu LIEBG, LIEAG și CCU. 97 Tabelul 25. Frecvența tipurilor de HPV găsite la femeile cu LIEBG, LIEAG și CCU. 100 13
LISTA FIGURILOR Figura 1. Arborele filogenetic al secvențelor LCR HPV 16. 28 Figura 2. Genomul virusului papilomului uman. 29 Figura 3. Istoria naturală a oncogenezei HPV cervicale. 36 Figura 4. Dezvoltarea histologică a cancerului de col uterin. 38 Figura 5. Atipia celulelor scuamoase (ASC-US). 45 Figura 6. Harta municipiului Pasto, unde se află siturile de includere a probelor. 46 Figura 7. Inelarea primerilor PCO3 și PCO4 în gena β-globinei umane, poziția 13 nta la 123 ntg. 50 Figura 8. Reprezentarea locului de inelare a primerilor GP5 + și GP6 + în genomul HPV 18, poziția 6.600 nta la 6.744 ntg. 52 Figura 9. Amplificarea genei β-globinei în probele de periaj cervical. 73 Figura 10. Amplificarea genei β-globinei în probe de biopsie. 74 Figura 11. Test de optimizare Mg ++. 77 Figura 12. Amplificarea genei HPV L1. 77 Figura 13. Alinierea secvenței identificate în eșantionul UDN 217 de către Blastn și MegaBlast de la NCBI. 80 14
LISTA ANEXELOR Anexa A. Formular de consimțământ informat. 127 Anexa B. Format Istoricul clinic de prevenire a cancerului. 132 Anexa C. Formatul rezultatului citologiei. 133 Anexa D. Test de optimizare Mg ++ pentru PCR/L1 GP5 +/GP6 +. 133 Anexa E. Rezultate negative ale petei de linie inversă. 135 Anexa F. Alinierea secvențelor de periere cervicală și probe de biopsie. 136 15
prb: Retinoblastom Protein RCS: din acronimul în engleză [The Rapid Capture System] mRNA: Messenger Ribonucleic Acid RLB: din acronimul în engleză [Reverse Line Blot] HSV: Herpes Simplex Virus HSV-2: Herpes Simplex Virus tip 2 HIV: Virusul imunodeficienței umane HPV: Virusul papilomului uman HPV-RA: Virusul papilomului uman Risc ridicat HPV-BR: Virusul papilomului uman Risc scăzut 17
CIN II: este considerată o leziune intraepitelială scuamoasă de înaltă calitate. Limitat la cele două treimi bazale ale epiteliului cervical. CIN III: În acest tip de leziune, considerată și de grad înalt, displazia este severă și acoperă mai mult de două treimi din epiteliul cervical. În unele cazuri, inclusiv întreaga grosime a mucoasei cervicale. PCR-L1: Reacția în lanț a polimerazei care permite amplificarea unui fragment de aproximativ 150 pb din gena HPV L1, utilizând primerii GP5 +/GP6 +. PREVALENȚĂ: Este numărul de cazuri de boală sau eveniment într-o populație și la un moment dat. REVERSE LINE BLOT: Este un test bazat pe hibridizare inversă, care permite identificarea a 37 de genotipuri HPV utilizând un sistem miniblotter și o membrană de hibridizare, după amplificarea probelor prin GP5 +/GP6 + PCR. HPV-RA: Papilomavirus uman cu risc oncogen ridicat, asociat cu dezvoltarea de carcinoame ano-genitale invazive. BR-HPV: Papilomavirus uman cu risc oncogen scăzut, legat de leziuni benigne-negi și condiloame. douăzeci