Reducerea grâului în dietă scade nivelul deoxinivalenolului urinar la adulții din Marea Britanie

grâului

  • rezumat
  • Introducere
  • Metode
  • Design de studiu
  • Agende alimentare
  • Extracție DON urinară
  • Analiza LC-MS a DON extras
  • Analiza creatininei
  • Analiza statistică
  • Rezultate
  • Discuţie
  • Glosar

rezumat

Metode

Design de studiu

Studiul a fost realizat pe o perioadă de 7 zile și a implicat 25 de voluntari, 16 femei și 9 bărbați, cu vârste cuprinse între 21 și 59 de ani. În zilele 1 și 2 („dietă normală”) s-au ținut jurnale alimentare cu greutate medie și în ziua 3 s-a obținut o probă de urină goală din prima dimineață. În zilele 3-6 („intervenție redusă a grâului”) voluntarilor li s-a cerut să restricționeze aportul dintr-o listă specifică de alimente susceptibile să conțină grâu (pâine, prăjituri, paste, cereale pentru micul dejun etc.) și să le înlocuiască cu articole dintr-o lista alternativelor sugerate (de exemplu, orez, cartofi). În zilele 5 și 6, jurnalele alimentare au fost menținute din nou și s-a obținut o probă de urină goală în prima dimineață a zilei 7. A fost obținut consimțământul informat de la toți voluntarii înainte de studiu și aprobarea etică a Comitetului de etică al NHS Research, Bradford, Regatul Unit. .

Agende alimentare

Jurnalele alimentare au fost complet codificate folosind un pachet intern de analiză dietetică bazat pe Microsoft Access, utilizând Compoziția alimentară din Marea Britanie (Holland și colab., 1992). Pentru a evalua conformitatea cu intervenția, frecvența consumului anumitor grupuri de alimente (pâine, prăjituri, cereale pentru micul dejun și paste) în timpul dietei normale (zilele 1 și 2) a fost comparată cu cea a intervenției (zilele 5 și 6). În plus, au fost estimate greutăți alimentare specifice și a fost determinat aportul alimentar pe bază de grâu pentru fiecare individ pe baza principalelor surse de grâu (pâine, cereale pentru micul dejun, chifle, paste, prăjituri și prăjituri). Alte surse de grâu apar în dietă, cum ar fi sosurile și îngroșătorii. Cu toate acestea, contribuția sa la aportul total de grâu a fost estimată a fi de o importanță relativ mică.

Extracție DON urinară

DON urinar total a fost măsurat utilizând o modificare a metodei lui Meky și colab. (2003) și utilizarea 13 C-DON (Biopure Referenzsubstanzen, Tulln, Austria) ca IS. IS a fost un amestec conținând predominant 13C15-DON (masă moleculară (M r) 311; 81,4%), dar și 13C14-DON (M 310); 16,8%). Adecvarea acestui compus ca IS a fost stabilită recent în analiza LC-MS/MS a cerealelor contaminate cu DON (Haubl și colab., 2006).

În analiza noastră de urină, probele au fost centrifugate (2000 g; 15 min; 4 ° C) și IS a fost adăugat la 4 ml de urină pentru a da o concentrație finală de 5 ng/ml. PH-ul fiecărei probe a fost ajustat la 6,8 și 23 000 U de β-glucuronidază (Escherichia coli Tip IX-A; Sigma) au fost adăugate în 1 ml de 75 mM KH 2 PO 4 și incubate într-o baie de apă cu agitare timp de 18 ore. la 37 ° C. După digestie, probele au fost centrifugate (2000 g; 15 min; 4 ° C) și supernatantul a fost diluat la 16 ml cu PBS (pH 7,2). Materialul diluat a fost trecut prin coloane DONtest ​​Immunoaffinity (IAC) (Vicam, Watertown, MA, SUA) pentru a extrage DON conform instrucțiunilor producătorului. DON a fost eluat din coloane cu 4 ml de metanol și extractele au fost uscate sub vid folosind un Savant Speed ​​Vac și reconstituite în 250 pl de etanol 10% (v/v) pentru analiză. Două alicote ale unei probe de urină cu niveluri cunoscute de DON au fost, de asemenea, adăugate la IS și analizate cu fiecare lot de probe de testare ca control al calității (QC).

Analiza LC-MS a DON extras

DON a fost analizat prin HPLC (Waters 2795 Separation Module, Milford, MA, SUA) cu detecție MS (spectrometru de masă Micromass Quattro Micro triple quadrupole, Manchester, Marea Britanie). Separarea DON a fost realizată folosind o coloană Luna C18 (150 × 4,6 mm, dimensiunea particulelor de 5 μm (Phenomonex, Macclesfield, Marea Britanie). Faza mobilă a fost începută cu 20% metanol și s-a desfășurat isocratic timp de 10 minute. O fază de spălare timp de 6 minute ). apoi s-a efectuat min folosind 75% metanol, după care 20% metanol a fost reintrodus cu echilibrul sistemului la această concentrație pentru încă 11 min. Debitul a fost de 1 ml/min și volumul de injecție a fost de 25 pl. Eluantul din coloana HPLC a fost direcționat către camera de desolvatare a MS și restul a fost trimis la deșeuri.