Modularea fiziologiei gastrointestinale de către tulpinile probiotice de Lactobacillus casei și

fiziologiei

В
В 		В

SciELO al meu

Servicii personalizate

Revistă

  • SciELO Analytics
  • Google Scholar H5M5 ()

Articol

  • Spaniolă (pdf)
  • Articol în XML
  • Referințe articol
  • Cum se citează acest articol
  • SciELO Analytics
  • Traducere automată
  • Trimite articolul prin e-mail

Indicatori

  • Citat de SciELO
  • Acces

Linkuri conexe

  • Citat de Google
  • Similar în SciELO
  • Similar pe Google

Acțiune

Analele sistemului sanitar Navarra

versiuneaВ tipăritВ ISSN 1137-6627

Anales Sis San NavarraВ vol.29В nr.3В PamplonaВ septembrie/decembrie 2006

ARTICOLE ORIGINALE

Modularea fiziologiei gastro-intestinale prin tulpini probiotice de Lactobacillus casei și Bifidobacterium bifidum

Modularea fiziologiei gastrointestinale prin tulpini probiotice de Lactobacillus casei și Bifidobacterium bifidum

J. Barrenetxe 1, P. Aranguren 1, A. Grijalba 2, J.M. Martónez-Peña 3, F. 1 martie și E. Urdaneta 1

1. Laboratorul de fiziologie și nutriție. Departamentul de Științe ale Mediului Natural. Universitatea Publică din Navarra. Pamplona.
2. Serviciul de biochimie. Spitalul Navarra. Pamplona.
3. Serviciul de anatomie patologică. Spitalul Navarra. Pamplona.

Acest proiect de cercetare a fost finanțat cu grantul Ortiz de Landzzuri de la Departamentul de Sănătate al Guvernului din Navarra.

Cuvinte cheie. Tulpini probiotice. Intestin. SGLT1. PEPT1.

Cuvinte cheie. Tulpini prebiotice. Intestin. SGLT1. PEPT1.

Introducere

Prin urmare, obiectivul prezentei lucrări este de a studia dacă aportul de diete suplimentate cu fiecare dintre aceste probiotice (L. casei sau B. bifidum) afectează dezvoltarea animalelor și în special funcția intestinală, în special imunitar, digestiv și absorbant. Aceste rezultate vor fi decisive pentru a utiliza ulterior aceste microorganisme ca terapie în diferite situații patologice.

Obținerea și creșterea tulpinilor bacteriene

Animale și diete

Șoareci elvețieni (Charles River Laboratory Animals, Barcelona) de 28 de zile și 20 g de greutate corporală inițială au fost distribuiți aleatoriu în fiecare dintre cele trei grupuri experimentale (n = 30-20): control (C), Bifidobacterium bifidum (Grup Lactobacillus casei (L). Au fost așezați în cuști (n = 5) într-o cameră la temperatură constantă (22 ± 2 ° C) și umiditate și o fotoperioadă controlată de 12 h lumină și 12 h întuneric.

Analiza histologică

Probele de colon colectate pentru studiu histologic au fost fixate imediat în 4% formalină timp de 24 de ore. Au fost apoi deshidratați și după includerea lor în parafină, au fost tăiați în bucăți de 5 mm și colorate în hematoxilină-eozină pentru o analiză microscopică ulterioară.

Obținerea intestinului șoarecelui VMBC

Mucoasa a fost resuspendată într-un mediu care conține 100 mM manitol și 2 mM acid N-2-hidroxietilpiperazină-NV'-2-etansulfonic acid (HEPES) la pH 7,1 cu Tris-hidroximetil-aminometan. Suspensia a fost omogenizată într-un omogenizator Potter-Elvehjem (Braun, Melsungen, Germania) la 3.000 rpm la 4 ° C timp de 1 min. MgCI2 a fost apoi adăugat la o concentrație finală de 10 mM și amestecul a fost incubat timp de 20 min sub agitare continuă și rece. Ulterior, a fost centrifugat la 2.000 x g timp de 15 minute, iar supernatantul a fost colectat și centrifugat la 27.000 x g timp de 30 de minute. Peleta astfel obținută a fost resuspendată într-un mediu format din 100 mM manitol, 0,1 mM sulfat de magneziu și 2 mM HEPES la pH 7,4 cu Tris.

În cele din urmă, amestecul a fost centrifugat la 27.000 x g timp de 30 min și peleta a fost resuspendată într-un mediu conținând 300 mM manitol, 0,1 mM sulfat de magneziu și 10 mM HEPES la pH 7,4 cu Tris.

O probă din suspensia astfel obținută a fost utilizată pentru determinarea de către Bradford a cantității de proteine ​​prezente și măsurarea activității zaharazei (EC3.2.1.48), pentru a verifica îmbogățirea acesteia în membrana apicală, care sa dovedit a fi să fie de 5 ori în comparație cu omogenizarea inițială.

Activitatea enzimatică

Studii de absorbție a substratului

Absorbția de D-galactoză a fost determinată la 37 ° C în prezența unui gradient de sodiu. Mediul de incubație utilizat la pH 7,4 a constat din 0,1 mM D-galactoză, 100 mM NaSCN, 100 mM manitol, 0,1 mM MgSO4, 10 mM HEPES și substratul radioactiv utilizat ca un trasor (1 mCi/mL D- [1-14 C ] galactoză; Amersham Radiochemical Center, Marea Britanie).

Analiza expresiei proteinelor prin Western blot

Expresia transportorilor PEPT1 și SGLT1 în VMBC a diferitelor grupuri experimentale a fost măsurată prin Western blot. Probele au fost diluate într-un mediu compus din 50 mM Tris-HCI, pH 6,8, 2% SDS, 10% glicerol, 5% 2-mercaptoetanol și 0,05% albastru de bromofenol. După fierberea lor timp de trei minute, acestea au fost încărcate (50 ug) pe un gel de poliacrilamidă 12% și separate prin electroforeză timp de 60 min. Proteinele astfel separate au fost apoi transferate la o membrană de nitroceluloză (Hybond P., Amersham ? Pharmacia Biotech, Barcelona) prin electroforeză la 250 mA/100 V și 4 ° C timp de 2 ore.

analize statistice

Rezultatele sunt exprimate ca valoare medie ± ESM. Pentru analiza statistică, a fost utilizat programul SPSS (versiunea 12.0) și testul Kruskal Wallis a fost aplicat cu comparațiile corespunzătoare a posteriori. Diferențele dintre grupuri au fost considerate semnificative statistic atunci când p

Dezvoltarea animalelor

Includerea ambelor tulpini probiotice în dieta obișnuită a animalelor nu le modifică greutatea corporală, ceea ce indică faptul că nu exercită niciun efect negativ asupra dezvoltării acestor animale. În plus, nu s-au observat diferențe în parametrii sanguini măsurați sau în greutatea diferitelor organe extrase (jejun, ficat, splină, pancreas și colon).

Prin urmare, putem deduce că aportul de Lactobacillus casei Da Bifidobacterium bifidum nu modifică creșterea și dezvoltarea normală a acestor animale și nici starea lor metabolică.

Morfologia intestinului

Aceste fapte indică faptul că ambele tulpini ar putea exercita un efect activator asupra sistemului imunitar intestinal.

Absorbția nutrienților și activitatea enzimatică în VMBC

A fost analizat efectul dietelor suplimentate asupra fiziologiei intestinale a acestor animale. Așa cum se arată în figura 3, în toate testele de activitate enzimatică efectuate (zaharază, maltază și aminopeptidază N) aceste activități par crescute. În cazul activităților maltazei și aminopeptidazei N, această creștere este mai clară în grupul alimentat cu Bifidobacterium că în hrănit cu Lactobacillus.