Inhiba; n creșterea experimentală a anevrismelor a; armatice abdominale folosind burete

Consultați articolele și conținutul publicat în acest mediu, precum și rezumatele electronice ale revistelor științifice la momentul publicării

Fiți informat în permanență datorită alertelor și știrilor

Accesați promoții exclusive la abonamente, lansări și cursuri acreditate

Urmareste-ne pe:

  • Introducere
  • Materiale și metode
  • Rezultate
  • Discuţie
  • Introducere
  • Materiale și metode
  • Pregătirea ebhg cu sau fără bfgf
  • Animale experimentale
  • Inducerea aaa experimentale
  • Grupuri de tratament
  • Analiza histologică
  • Analiza statistică
  • Rezultate
  • Modificări ale zilei în cele 5 grupuri
  • Analiza histologică
  • Discuţie
  • Bibliografie

armatice

Anevrismul aortic abdominal (AAA) este o tulburare comună și care pune viața în pericol, caracterizată printr-un dezechilibru între distrugerea și sinteza matricei extracelulare a peretelui aortic. Formarea anevrismului este asociată cu inflamația transmurală cronică, epuizarea populației de celule musculare netede (SMC) și producția excesivă a unei matrice metaloproteinazice (MMP), care determină degradarea anormală a elastinei și a colagenului 1, 2. Tratamentul standard al AAA este corecția chirurgicală prin plasarea implanturilor vasculare, precum și repararea endovasculară a anevrismului, toate cu scopul de a preveni ruperea letală a AAA. Cu toate acestea, nu există încă un tratament medical eficient pentru stabilizarea patologiei anevrismale și prevenirea extinderii sau rupturii ulterioare.

În studiul descris aici, am tratat șobolanii cu AAA experimentală folosind o foaie de burete cu hidrogel de gelatină (EBHG) sau EBHG cu bFGF încorporat pentru a investiga efectele acestor tratamente asupra progresiei AAA experimentale.

Materiale și metode Prepararea EBHG cu sau fără bFGF

BFGF uman recombinant cu un punct izoelectric de 9,6 a fost furnizat de Kaken Pharmaceutical (Tokyo, Japonia). EBHG a fost preparat așa cum s-a descris anterior 13. EBHG a fost realizat prin reticularea gelatinei acide cu un punct izoelectric de 4,9. A fost turnat într-o foaie (15 x 7 x 2 mm) și liofilizat. Înainte de a pune EBHG pe aorta, EBHG liofilizat a fost înmuiat cu o soluție apoasă cu sau fără bFGF timp de 1 oră pentru a obține EBHG cu sau fără bFGF, respectiv. Această foaie de burete de gelatină a fost proiectată să se degradeze în 2 săptămâni.

Animale experimentale

Șobolani Sprague-Dawley masculi (250-400 g) au fost obținuți de la CLEA (Tokyo, Japonia) și utilizați pentru experimente. Acest studiu a fost autorizat de Comitetul de îngrijire a animalelor de la Școala de Medicină a Universității Tohoku. Îngrijirea animalelor a respectat prevederile Ghidului pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator (National Research Council, Washington DC, 1996).

Inducerea AAA experimentală

Șobolanii au fost anesteziați cu o injecție i.p. de pentobarbital de sodiu (50-60 mg/kg greutate corporală: Dainippon Pharmaceutical, Osaka, Japonia) și s-a efectuat o laparotomie în linia mediană în condiții sterile. Un segment de 1 cm de aortă infrarenală a fost izolat și toate arterele lombare au fost ligate. Diametrul extern al aortei a fost măsurat înainte de perfuzia cu elastază (preinfuzie DA) folosind un etrier digimatic (Mitutoyo, Kanagawa, Japonia). Un cateter de polietilenă (Becton Dickinson, Sparks, MD) a fost introdus în artera iliacă externă dreaptă și a avansat către aorta izolată. O clemă atraumatică a fost plasată în aorta proximală și s-a făcut o ligatură temporară peste aorta distală pentru a fixa sonda. Aorta izolată a fost infuzată cu 2,7 unități de elastază pancreatică porcină tip I (E-1250, lot 84K7700; Sigma, St. Louis, MO) timp de 60 de minute folosind o pompă de injecție (TOP-5200; TOP, Tokyo, Japonia). După perfuzarea elastazei, ligatura și sonda au fost îndepărtate, ligând artera iliacă externă dreaptă. Retroperitoneul și peretele abdominal au fost închise. Șobolanii au fost reexaminați în ziua 14 după intervenție (14 DPI), iar DA maximă a fost măsurată.

Grupuri de tratament

Șobolanii experimentali cu perfuzie de elastază au fost împărțiți în mod aleatoriu în 5 grupe conform tratamentelor: un grup fără tratament (grup netratat, n = 10), un grup tratat cu EBHG cu apă distilată încorporată (grup EBHG, n = 10), 3 grupuri cu EBHG cu cantități diferite încorporate de bFGF (grupul EBHG + 100 ng, grupul EBHG + 1 μg și grupul EBHG + 10 μg; n = 10, 6 și respectiv 6). Aceste EBHG au fost plasate peste aortele de șobolani infuzate cu elastază, iar retroperitoneul a fost închis.

S-a efectuat evaluarea histologică a 3 grupuri de șobolani, inclusiv grupul netratat, grupul cu numai EBHG și cel cu EBHG '100 ng (n = 6, respectiv). Șobolanii au fost sacrificați în ziua 14 după intervenție; O soluție de paraformaldehidă de 4% în soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) a fost perfuzată timp de 5 minute prin ventriculul stâng, iar aortele îndepărtate au fost fixate din nou cu o soluție de paraformaldehidă de 4% în PBS timp de 2 ore, urmând 100% etanol. Probele au fost încorporate în parafină și s-au obținut secțiuni histologice de 5 μm, care au fost colorate cu colorare Verhoeff-van Gieson (VVG) pentru fibre elastice și pregătite pentru studiul lor imunohistochimic. Raportul dintre fibrele elastice colorate/aria mediei în colorarea VVG a fost calculat utilizând software-ul Image-J (NIH, Bethesda, MD).

Studiul imunohistochimic a fost efectuat după deparafinare și rehidratare. Secțiunile au fost tratate timp de 10 minute cu H202 pentru a bloca activitatea peroxidazei endogene. După blocarea cu 1% albumină serică bovină în PBS timp de 30 de minute, secțiunile histologice au fost incubate cu un anticorp primar peste noapte la 4 ° C, incluzând un anticorp monoclonal murin împotriva actinei α-musculare netede (α-SMA) umane (Sigma) pentru colorare de LMC de șobolan și un anticorp de iepure la bFGF de șobolan (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Ulterior, incubația a fost efectuată cu un anticorp secundar biotinilat și un complex avidin-biotină (Dako Cytomation, Glostrup, Danemarca) conform protocolului producătorului. Secțiunile histologice au fost contracolorate cu hematoxilină. Experimentele de control negativ au fost efectuate prin înlocuirea anticorpului primar cu o imunoglobulină G. nespecifică de șoarece sau iepure. Densitatea mediană a LMC a fost determinată prin medierea celulelor pozitive α-SMA în 8 câmpuri de mare putere alese din 2 secțiuni histologice.