Explorarea structurii țesutului adipos prin compensarea metilsalicilatului și protocolul de imagistică 3D (tradus

rezumat

Aici, descriem o metodă de curățare simplă, ieftină și rapidă pentru a rezolva structura 3D a țesutului adipos alb de la om și șoarece folosind o combinație de markeri pentru a vizualiza vasculatura, nucleii, celulele imune, neuronii și proteinele stratului de picături lipidice folosind imagini fluorescente.

explorarea

Abstract

Introducere

Obezitatea se caracterizează printr-o creștere a masei țesutului adipos și a devenit o problemă majoră de sănătate publică în întreaga lume, deoarece persoanele cu obezitate prezintă un risc crescut de a dezvolta boli cardiovasculare, diabet de tip 2, boli hepatice și unele tipuri de cancer.

O funcție fiziologică fundamentală a țesutului adipos este de a modula homeostazia lipidică a glucozei și a corpului întreg 1, 2. În perioada de hrănire, adipocitele (adică principalele celule ale țesutului adipos) stochează excesul de glucoză și lipide furnizate de o masă în trigliceride. În timpul postului, adipocitele descompun trigliceridele în acizi grași neesterificați și glicerol pentru a menține cererea de energie a organismului. În timpul dezvoltării obezității, țesutul adipos se extinde, crescând dimensiunea (hipertrofia) și/sau numărul (hiperplazia) adipocitelor 1, pentru a-i crește capacitatea de stocare. Când expansiunea țesutului adipos atinge limita sa, o constantă foarte variabilă în rândul pacienților, lipidele rămase se acumulează în alte organe metabolice, inclusiv mușchii și ficatul 3, 4, ceea ce duce la eșecul funcțional al acestora și inițiază complicații cardio-metabolice asociate. 1, 5. Prin urmare, identificarea mecanismelor care guvernează expansiunea țesutului adipos este o provocare clinică cheie.

Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.

Protocol

Acest protocol a fost testat și validat pentru toate depunerile de șoareci și țesutul adipos alb uman. Țesuturile adipoase umane și de șoarece au fost colectate în conformitate cu legile europene și aprobate de comitetele etice franceze și suedeze.

1. Fixarea țesutului adipos alb șoarece și uman

2. Permeabilizarea și saturația țesutului adipos alb șoarece și uman

3. Procedura de colorare a țesutului adipos alb șoarece și uman

4. Procedura de curățare a țesutului adipos alb șoarece și uman

5.3 Imagistica confocală a țesutului adipos alb transparent

  1. Transferați țesutul într-o cameră de imagistică metalică dotată cu un fund de sticlă (a se vedea Tabelul materialelor)sub o capotă chimică și umpleți camera cu salicilat de metil proaspăt.
    NOTĂ: Pentru a fixa țesutul în poziție și a preveni plutirea sau deplasarea laterală a camerei, aplicați mai multe lamele de sticlă rotunde de 18 mm (consultați Tabelul materialelor)pe partea de sus a țesăturii atunci când se montează pe cameră.
  2. Așezați camera de imagini pe un microscop confocal inversat.
  3. Imagineați țesutul folosind un obiectiv cu mărire redusă (de exemplu, obiectiv 4x) pentru a genera câteva hărți 3D de câțiva cm 3 a întregului țesut adipos sau a probei de țesut uman.
  4. Selectați mai multe zone pentru eșantionarea țesuturilor la o mărire mai mare. Folosiți în mod obișnuit un obiectiv de aer cu rază lungă de 20 de ori care oferă un raport bun între rezoluție și adâncime. Achiziționăm imagini de mozaic mari cu z-stive între 600 și 2000 m adâncime.
    NOTĂ: Utilizați un obiectiv de distanță lungă pentru a perfora în țesut.