Determinarea sexului folosind tehnica de reacție în lanț a polimerazei la camelide

determinarea

В
В 		В

Servicii personalizate

Revistă

  • SciELO Analytics
  • Google Scholar H5M5 ()

Articol

  • Spaniolă (pdf)
  • Articol în XML
  • Referințe articol
  • Cum se citează acest articol
  • SciELO Analytics
  • Traducere automată
  • Trimite articolul prin e-mail

Indicatori

  • Citat de SciELO

Linkuri conexe

  • Similar în SciELO

Acțiune

Jurnalul de cercetări veterinare din Peru

versiuneaВ tipăritВ ISSN 1609-9117

Pr. Investiga. veterinar. Peru v.23 n.3В LimaВ august 2012

Utilizarea reacției în lanț a polimerazei pentru sexul camelidelor sud-americane

Vanya Muntenegru V. 1, Lenin Maturrano H. 1,2,3, Jane C. Wheeler 2, Rail Rosadio A. 1,2

Obiectivul acestui studiu a fost de a dezvolta o tehnică PCR pentru a determina sexul camelidelor sud-americane (CSA) folosind secvențe de Zinc Finger Protein (ZF) din probe de sânge și fecale, precum și celule din embrioni de alpaca. Au fost utilizate un total de 28 de probe de sânge de alpaca, lama și vicuña, 20 de probe de fecale de vicuana și guanaco și 22 de embrioni de alpacă colectați între 72 și 96 de ore după copopulă. Probele de fecale și embrioni au fost păstrate în 96% și respectiv 70% etanol. ADN-ul a fost extras din sânge și fecale folosind truse comerciale. Au fost utilizate trei metode (fierbere, proteinază K și fenol-cloroform) pentru extragerea ADN-ului din embrioni de alpaca. Două tehnici de PCR au fost dezvoltate pentru a analiza ADN-ul: multiplex (pentru ADN-ul fecal și de probă de sânge) și PCR heminestat (pentru ADN-ul celulelor embrionare). PCR multiplex a determinat cu exactitate sexul în 100% din probele de ADN extrase din sânge, în 87,5% din probele extrase din fecale proaspete și în 50% din probele de fecale în vârstă de 4 ani. Cu toate acestea, PCR heminestată nu a putut fi optimizată.

Cuvinte cheie: ADN, PCR, sexing, camelide sud-americane

INTRODUCERE

MATERIALE ȘI METODE

Obținerea probelor de ADN

Extragerea ADN-ului din sânge

Extracția ADN din scaun

Extracția ADN-ului din embrioni

Cuantificarea ADN-ului

Concentrația și rata de puritate a ADN-ului extras din toate probele au fost determinate prin spectrofotometrie la 260 nm și 280 nm. Calitatea ADN-ului a fost verificată prin electroforeză pe un gel de agaroză.

Procesul de optimizare a ADN-ului din sânge a constat în amplificarea segmentelor de diferite dimensiuni ale genei ZF foarte conservate la mamifere, folosind trei primeri (Aasen și Medrano, 1990). Protocoalele au folosit primerii ZFX2 și ZFX4 pentru a amplifica un segment de 250 de perechi de baze (bp) prezent pe ambii cromozomi sexuali (ZFX și ZFY) și un al treilea ZFY2 invers utilizat împreună cu primerul ZFX2 pentru a amplifica un segment de 130 bp, prezent doar pe cromozomul Y (ZFY) (Muntenegru și colab., 2007).

Rezoluția fragmentelor amplificate

Produsele fiecărei PCR au fost analizate pe un gel de agaroză 2% în soluție tampon TBE 0,5X (Tris, acid boric, EDTA), într-o cameră de electroforeză orizontală împreună cu un marker de greutate moleculară, pentru a determina dimensiunea. Aproximativ a fragmentelor amplificate . Produsele PCR au fost colorate cu bromură de etidiu, vizualizate pe un transiluminator și fotografiate cu o cameră Polaroid (DS 34).