Centrifugaci; n

Centrifugarea este o tehnică de sedimentare, accelerată grație utilizării forței centrifuge. Se aplică analizei sau separării amestecurilor de particule, celule, organite sau molecule.

Teoria centrifugării și aspectele cantitative: vezi Luque, p.123 sau Freifelder, p.298.

Instrumental

1. Țevi

Fabricat din sticlă sau plastic. Rezistent chimic (solvenți, reactivi) și fizic (tensiune la viteze mari utilizate). Diverse dimensiuni și forme. Materiale plastice speciale pentru viteze mari.

2. Centrifugele

Puteți regla viteza, timpul, temperatura. Viteze mari (10 2-10 5 rpm).

3. Rotoare

Doua tipuri:	rotor unghiular sau fix	rotor brat oscilant

Modalități

În funcție de viteză:

Criteriu aproximativ:
Centrifugare cu viteză redusă	mai puțin de 10.000 rpm
Centrifugare de mare viteză	între 10.000 și 20.000 rpm
Ultracentrifugare	mai mult de 20.000 rpm

Conform scopului:

1. Centrifugarea analitică

Scop: măsoară proprietățile fizice ale particulelor care se așează, cum ar fi coeficientul lor de sedimentare sau masa lor moleculară. Mai ales în variantă ultracentrifugare analitice.

Moleculele sunt observate printr-un sistem optic pe parcursul centrifugare. Tuburile pentru centrifugă trebuie să fie din cuarț pentru a permite trecerea luminii vizibile și ultraviolete. Rotor rotativ, observare verticală.

2. Centrifugarea preparativă

Cel mai frecvent utilizat. Scop: izolează particule, celule sau molecule pentru analiză sau utilizare ulterioară. În general, se utilizează o cantitate mai mare de eșantion decât în analiză.

În funcție de mediul în care este centrifugată și de modul de aplicare a probei:

1. Centrifugarea diferențială

(Numit și frontieră mobilă). Tubul este umplut cu probă și centrifugat. Comportamentul fiecărei componente a eșantionului depinde de forma, dimensiunea, densitatea sa și, logic, a condițiilor de centrifugare. Se obțin doar 2 fracții: sediment și supernatant.

[Notă: cuvântul precipitat este mai potrivit pentru ceva insolubil, care precipită prin centrifugare sau prin alte mecanisme (de exemplu, o reacție chimică); sediment este mai corect pentru ceea ce a fost forțat să meargă la fund, dar ar fi totuși solubil; peletă este un cuvânt englezesc pentru ceea ce este compactat până la fund ca urmare a centrifugării]

A aplicație tipic este fracționarea subcelulară (separarea diferitelor componente ale unei celule, în principal organele) (vezi Luque sau Alberts) folosind centrifugări succesive la viteză crescătoare.

2. Centrifugarea cu viteză zonală sau de sedimentare

Proba se aplică într-un strat subțire pe mediul de centrifugare, care este un gradient de densitate. Sub forță centrifugă, particulele se așează prin gradientul concentrându-se în zone sau benzi discrete. Viteza de înaintare (și, prin urmare, mecanismul de separare) depinde de mărimea, forma și densitatea sa; toți acești parametri sunt combinați în coeficientul de sedimentare,

" Coeficientul de sedimentare "= s = (" viteza sedimentării ")/(" accelerația centrifugă ")`

care se măsoară în unități svedberg (1 = 10 −13 secunde).

Centrifugarea trebuie să se încheie înainte ca oricare dintre particulele separate să ajungă la fundul tubului. Componentele separate sunt colectate individual prin aspirarea foarte atentă a diferitelor benzi sau, mai bine, prin străpungerea fundului tubului și colectarea lichidului care cade în fracțiuni.

Se poate vedea o animație a separării.

Gradientul de densitate este creat de un gradient de concentrație: creșterea concentrațiilor, coborârea tubului, a unui component adecvat. Pentru aceasta se utilizează zaharoză, clorură de cesiu, albumină, ser fetal bovin. sau medii comerciale precum Ficoll - o polizaharidă sintetică -, Percoll, metrizamidă.

Puteți pregăti:
inca gradient discontinuu sau eșalonat, manual
b) a gradient continuu, folosind un dispozitiv de formare a gradientului