Blocarea activității tlr2 scade și stabilizează leziunile aterosclerotice avansate în

tlr2

  • rezumat
  • Scop:
  • Metode:
  • Rezultate:
  • Concluzie:
  • Introducere
  • Materiale și metode
  • Animale și design experimental.
  • Colectarea și prelucrarea țesuturilor.
  • Analiza biochimică
  • Colorare histologică și imunohistochimică.
  • Analize de etichetare dUTP nichel mediate de TdT in situ
  • Western blots
  • analiza statistică
  • Rezultate
  • Blocarea activității TLR2 reduce și stabilizează leziunile aterosclerotice din artera brahiocefalică
  • Blocarea TLR2 atenuează inflamația în arterele aterosclerotice
  • Blocarea TLR2 scade apoptoza macrofagelor și expresia CHOP în leziunile aterosclerotice avansate
  • TLR2 mediază formarea aterosclerotică accelerată și reglează expresia CHOP și apoptoza la șoarecii cu deficit de ApoE hrăniți cu diete HC
  • Discuţie
  • Contribuția autorului

rezumat

Scop:

Semnalizarea receptorului de tip 2 (TLR2) joacă un rol critic în inițierea aterosclerozei. Obiectivul acestui studiu a fost de a investiga dacă blocarea activității TLR2 ar putea produce efecte terapeutice asupra aterosclerozei avansate.

Metode:

La vârsta de 40 de săptămâni, șoarecii cu deficit de apolipoproteină E (ApoE -/-) hrăniți cu o dietă normală au fost injectați intravenos cu un anticorp neutralizant TLR2 sau cu IgG compatibil cu izotipul timp de 18 săptămâni. Șoarecii ApoE -/- Tlr2 -/- au fost luați drept control pozitiv. La sfârșitul tratamentelor, s-au măsurat nivelurile lipidelor plasmatice și s-au analizat morfologia plăcii, expresia citokinelor pro-inflamatorii și apoptoza în artere. În a doua parte a acestui studiu, șoarecii ApoE -/- și ApoE -/- Tlr2 -/- în vârstă de 6 săptămâni au hrănit o dietă bogată în colesterol timp de 12 până la 24 de săptămâni, nivelurile de expresie ale TLR2 și markerii apoptotici din artere au fost examinat.

Rezultate:

Blocarea activității TLR2 cu anticorpul neutralizant TLR2 sau inactivarea genei Tlr2 nu a modificat nivelul lipidelor plasmatice la șoarecii ApoE -/-. Cu toate acestea, manipulările farmacologice și genetice au redus semnificativ dimensiunea plăcii și stenoza vaselor și au crescut stabilitatea plăcii în arterele brahiocefalice. Efectele protectoare ale antagonismului TLR2 au fost asociate cu expresia suprimată a citokinelor pro-inflamatorii IL-6 și TNF-α și cu inactivarea factorilor de transcripție NF-κB și Stat3. Mai mult, blocarea activității TLR2 atenuează apoptoza macrofagelor indusă de stres în arterele brahiocefalice, care ar putea promova rezoluția nucleilor necrotici în ateroscleroza avansată. Mai mult, dieta cu nivel ridicat de colesterol a accelerat în mod proeminent formarea aterosclerotică și a crescut expresia proteinei CHOP pro-apoptotice și apoptoza la șoarecii ApoE -/- decât la ApoE -/- Tlr2 -/șoareci - .

Concluzie:

Blocarea farmacologică sau genetică a activității TLR2 scade și stabilizează leziunile aterosclerotice avansate la șoarecii ApoE -/-. Prin urmare, vizarea semnalizării TLR2 poate fi o strategie terapeutică promițătoare împotriva aterosclerozei avansate.

Introducere

Ateroscleroza este o cauză frecventă a bolilor cardiovasculare. Boala cardiovasculară este principala cauză de deces și reprezintă o amenințare tot mai mare pentru sănătatea umană la nivel mondial 1. Studiile epidemiologice și experimentale au stabilit un rol predominant al inflamației în toate etapele aterosclerozei, de la formarea plăcilor aterosclerotice stabile timpurii până la plăcile avansate care sunt predispuse la ruptură 2, 3, 4, 5. Recent, mai multe studii s-au concentrat asupra efectelor intervențiilor farmacologice asupra stabilității plăcilor avansate, deoarece ruperea leziunilor instabile contribuie la sindromul coronarian acut 4, 6, 7. Plăcile instabile se caracterizează prin nuclei necrotici plini cu lipide mari, încapsulați de un strat fibros subțire, niveluri ridicate de mediatori proinflamatori și proteaze matriciale și apoptoză. Dezvoltarea plăcilor instabile este asociată cu participarea sistemelor imune înnăscute și adaptive.

Receptorii asemănători taxelor (TLR) sunt o familie de receptori de recunoaștere a modelelor care joacă un rol cheie în imunitatea înnăscută și inițiază răspunsuri inflamatorii. Ligarea acestor receptori inițiază activarea factorului nuclear κB (NF-κB), ceea ce duce la exprimarea unei game largi de gene inflamatorii 8, 9. Dintre TLR-urile caracterizate, TLR2 este unic datorită capacității sale de heterodimerizare cu TLR1 sau TLR6, rezultând o specificitate relativ largă a ligandului, care include atât liganzi endogeni, cât și exogeni. În special, toți agoniștii endogeni potențiali TLR2, inclusiv proteina 1 din cutia cromozomială cu mobilitate mare (HMGB1) și componentele lipoproteice oxidate, se găsesc în leziunile aterosclerotice 12, 13, 14. Mai mult, calea de semnalizare TLR2 este asociată cu răspunsul la stres al reticulului endoplasmatic (ER). Stresul ER poate crește expresia TLR2 in vitro și in vivo, iar TLR2 contribuie la apoptoză în macrofage care suferă stres ER declanșat de lipide. Prin urmare, TLR2 poate fi o țintă potențială pentru intervenții terapeutice în tratamentul aterosclerozei.

Materiale și metode

Animale și design experimental.

Șoarecii ApoE -/- Tlr2 -/- au fost generați din încrucișări heterozigoți de șoareci ApoE -/- (fundal C57BL/6, Laboratorul Jackson) și șoareci Tlr2 -/- (fundal C57BL/6, Laboratorul Jackson). Genotipurile șoarecilor homozigoti knockout sau ApoE single knockout au fost confirmați prin PCR, așa cum s-a descris anterior 18. Toate animalele au fost adăpostite în condiții standard de umiditate, temperatura camerei și cicluri de lumină întunecată, cu acces la apă și alimente după bunul plac. Studiile au fost realizate în conformitate cu principiile prezentate de Comitetul instituțional pentru etica îngrijirii și tratamentului animalelor în cercetarea biomedicală (Beijing, China).

Colectarea și prelucrarea țesuturilor.

După ce șoarecii au postit 4 ore, sângele a fost obținut prin plexul venos retroorbital pentru măsurarea lipidelor. Șoarecii au fost apoi anesteziați utilizând 50 mg/kg ip de pentobarbital și perfuzați prin ventriculul inimii stângi cu soluție salină tamponată cu fosfat rece ca gheața sub presiune fiziologică. Aortele au fost excizate rapid, au fost înghețate rapid de la arcada aortică la bifurcația iliacă și au fost menținute la -80 ° C înainte de analiza proteinelor. Întreaga arteră brahiocefalică a fiecărui animal a fost fixată în paraformaldehidă 4% timp de 24 de ore la 4 ° C, încorporată în parafină și secționată în serie (5 μm grosime).