Kefirul îmbunătățește sindromul ficatului gras prin inhibarea căii lipogenezei la șoareci

sindromul

  • Subiecte
  • rezumat
  • Scop:
  • Rezultate:
  • Concluzie:
  • Introducere
  • Materiale și metode
  • Pregătirea Kefir
  • Proiectarea și studiul animalelor.
  • Compozitia corpului
  • Risipa de energie
  • Determinarea markerilor biochimici.
  • Petă roșie ulei O
  • Colorarea hematoxilinei și eozinei
  • Colorarea imunohistochimică
  • Transcriptază inversă în timp real (RT) -PCR
  • Analiza Western Blot
  • analiza statistică
  • Rezultate
  • Efectul kefirului asupra aportului alimentar, greutății corporale, ficatului, ratei metabolice bazale și consumului de energie
  • Efectul chefirului asupra compoziției corpului
  • Efectul chefirului asupra hepatomegaliei și a leziunilor hepatice
  • Efectul kefirului asupra TG și TC
  • Efectul kefirului asupra parametrilor biochimici serici asociați cu funcția hepatică
  • Efectele tratamentului cu kefir asupra expresiei genelor implicate în oxidarea lipidelor și lipogeneza
  • Kefirul suprimă lipogeneza
  • Discuţie
  • Informatie suplimentara
  • Fișiere imagine
  • Figura suplimentară 1
  • Documente Word
  • Tabel suplimentar 1
  • Tabelul suplimentar 2
  • Legenda figurii suplimentare

Subiecte

  • Metabolism
  • Boală hepatică grasă nealcoolică
  • Obezitatea

rezumat

Scop:

Boala ficatului gras este frecvent asociată cu obezitatea, rezistența la insulină și diabetul. Ficatul gras sever este uneori însoțit de steatohepatită și poate duce la dezvoltarea carcinomului hepatocelular. În prezent, nu există un tratament eficient pentru boala ficatului gras nealcoolic (NAFLD); prin urmare, cercetările recente s-au concentrat pe dezvoltarea unor terapii eficiente pentru tratarea acestei afecțiuni. Acest studiu a avut ca scop evaluarea efectelor kefirului asupra metabolismului lipidelor hepatice la șoarecii ob/ob, care sunt frecvent folosiți pentru modelarea bolilor hepatice grase.

Rezultate:

Kefirul, care provine din munții Caucazului, este un lapte fermentat ușor alcoolic și acid. 5 Această băutură este produsă în mod tradițional prin inocularea laptelui cu cereale de chefir. Kefirul a fost utilizat clinic pentru tratarea bolilor gastro-intestinale, a hipertensiunii arteriale, a bolilor cardiace ischemice și a alergiilor. 5, 6 Mai multe studii au demonstrat numeroase activități biologice ale chefirului, inclusiv efecte antibacteriene, antifungice, antioxidante, antidiabetice, antitumorale și imunostimulatoare. Vujicic și colab. 7 a arătat că consumul de chefir reduce nivelul colesterolului seric la om.

În acest studiu, am investigat dacă tratamentul cu kefir a îmbunătățit simptomele sindromului ficatului gras la șoarecii cu gene inactive de leptină (ob/ob). Expresia mai multor gene care codifică proteinele implicate în calea lipogenezei, inclusiv proteina 1 de legare a elementelor de reglare a sterolului (SREBP1), acidul gras sintază (FAS) și acetil-CoA carboxilaza (ACC) și în calea lipidelor oxidative, inclusiv receptorul α activat de proliferatorul peroxizomului (PPARα) și carnitina hepatică palmitoiltransferază-1α (CPT1α), au fost măsurate după tratamentul cu kefir. Scopul acestui studiu a fost de a înțelege eficacitatea și mecanismul efectelor kefirului asupra sindromului ficatului gras pentru a promova utilizarea acestuia în modularea sau tratamentul NAFLD.

Materiale și metode

Pregătirea Kefir

Boabele inițiale de chefir au fost inoculate (5%, g/v) și propagate în lapte sterilizat la 20 ° C timp de 20 h pentru a le activa. Boabele au fost recuperate printr-o sită, re-vindecate (10%, greutate/volum) în lapte proaspăt sterilizat și incubate la 20 ° C timp de 20 de ore. 8 După ce boabele au fost filtrate, produsele fermentate au fost liofilizate sub formă de pulbere de kefir folosind un liofilizator (VirTis, Warminster, PA, SUA).

Proiectarea și studiul animalelor.

Compozitia corpului

Compoziția corporală a întregului animal a fost evaluată utilizând analizorul de compoziție a corpului întregului șoarece viu minispec (LF50) pe baza TD-RMN (Bruker Optik, Ettlingen, Germania). Această metodă oferă o măsurare precisă a grăsimii, a grăsimii, a lichidului liber și a apei la șoarecii vii.

Risipa de energie

Sistemul TSE LabMaster-3930 (Bad Homburg, Germania) utilizat pentru calorimetrie indirectă a efectuat măsurători computerizate cantitative ale ratei metabolice bazale și a cheltuielilor de energie. Pentru a calcula consumul de oxigen (VO 2), producția de dioxid de carbon (VCO 2) și coeficientul respirator (raportul dintre VCO 2 și VO 2), au fost monitorizate concentrațiile de gaz la intrarea și ieșirea din camerele etanșe. Ratele metabolice bazale (ciclul de lumină pentru animalele în repaus alimentar) și cele totale (48 h continue pentru animalele hrănite liber) au fost calculate din consumul de O 2 și din producția de CO 2. Episoadele de hrănire au fost monitorizate cu scale de precizie și înregistrate continuu pentru a calcula aportul de alimente.

Determinarea markerilor biochimici.

Nivelurile GOT, GPT, TC și TC în ser și ficat au fost măsurate colorimetric folosind un analizor automat (analizorul Beckman-Coulter Synchron LX20; Beckman, Fullerton, CA, SUA). 13

Petă roșie ulei O

Secțiunile hepatice congelate (5-7 µm) au fost colorate cu ulei roșu O timp de 20-30 min, spălate și contracolorate cu hematoxilină timp de 5 min pentru a determina acumularea de lipide hepatice. Fotomicrografiile reprezentative au fost capturate la mărirea × 400 folosind o cameră montată pe un microscop.

Colorarea hematoxilinei și eozinei

Țesutul hepatic a fost fixat în 10% formaldehidă tamponată și examinat folosind colorarea hematoxilinei și a eozinei, așa cum sa descris mai sus. 14, 15, 16

Colorarea imunohistochimică

Secțiunile fixate în formaldehidă și încorporate în parafină au fost tăiate la 5 pm grosime, separate și rehidratate printr-un gradient de alcooli în apă și apoi tratate cu apă clocotită timp de 15 minute. Secțiunile au fost incubate în peroxid de hidrogen 3% timp de 10 minute pentru a bloca activitatea peroxidazei endogene și apoi incubate peste noapte la 4 ° C cu anticorpi monoclonali primari de iepure împotriva SREBP-1 și ACC. Pentru regăsirea antigenului, secțiunile au fost imunizate cu ajutorul kitului VECTASTAIN ABC (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA, SUA), în conformitate cu specificațiile producătorului. Diaminobenzidina a fost utilizată pentru dezvoltarea colorării, iar secțiunile au fost contracolorate cu hematoxilină. 17, 18 Controlul negativ a constat în înlocuirea serului normal cu un anticorp primar.