O tehnică de ocluzie a arterei cerebrale medii pentru inducerea depresiei post-accident vascular cerebral la șobolani Protocol

rezumat

Aici prezentăm un protocol pentru inducerea depresiei post-accident vascular cerebral la șobolani prin ocluzia arterei cerebrale medii prin artera carotidă internă. Folosim testul de înot forțat Porsolt și testul de preferință zaharoză pentru a confirma și evalua stările de dispoziție depresive induse.

Abstract

Introducere

Accidentul vascular cerebral este al patrulea pe lista bolilor care comit moarte în Statele Unite 1, 2, 3, în timp ce provoacă majoritatea dizabilităților la adulții din țările dezvoltate. Acest lucru face ca accidentul vascular cerebral să fie un candidat de vârf printre cele mai importante probleme de sănătate din lume. Normalitatea la supraviețuitorii accidentului vascular cerebral este rară, aproximativ 15% -40% dintre victimele supraviețuitoare suferind de invaliditate permanentă, 20% necesitând îngrijire instituțională la 3 luni după debutul AVC 5 și aproximativ o treime din supraviețuitorii de 6 luni care au nevoie de alții pentru a le ajuta să trăiască în fiecare zi 6. Aparent, accidentul vascular cerebral reprezintă, de asemenea, creșterea cheltuielilor naționale de sănătate 7. Estimările de la American Heart Association au costuri legate de accident vascular cerebral în Statele Unite la peste 50 de miliarde de dolari în 2010 8 .

Accidentul vascular cerebral nu numai că provoacă leziuni pe termen lung indivizilor, dar unii supraviețuitori tind să sufere de tulburări emoționale și comportamentale, cum ar fi demența, oboseala, anxietatea, depresia, delirul și agresivitatea 9, 10, 11, 12, 13, 14. Cea mai recidivă sechelă psihologică după un accident vascular cerebral este depresia post-accident vascular cerebral (PSD), diagnosticată la aproximativ 40% -50% dintre supraviețuitorii 15, 16, 17. Depresia provocată de accident vascular cerebral determină creșterea morbidității și mortalității 18, 19, 20, 21, 22. Fiziopatologia PSD nu este pe deplin înțeleasă, dar pare a fi cauzată de mai mulți factori și este legată de dizabilitate, tulburări cognitive și locul leziunii 23 .

Modelul de șobolan al ischemiei cerebrale focale, creat de Mcao, este cel mai răspândit model animal de accident vascular cerebral 24, 25, 26, 27. Prin demonstrarea inducției PSD la șobolani prin ocluzia LCR prin ICA, sunt utilizate tehnici care minimizează mortalitatea și variabilitatea în modelul MCAO 28 .

Obiectivul principal al acestui protocol este de a delimita pașii pentru inducerea PSD la șobolani prin ocluzia MCA prin ICA, un model modificat de MCAO, care reduce mortalitatea și are ca rezultat variabilitatea 28. Obiectivele specifice includ efectuarea de examene neurologice și histologice (determinarea scorului de severitate neurologică [NSS], volumul zonei de infarct și edemul cerebral) pentru a verifica eficacitatea MCAO și utilizarea testelor comportamentale pentru a examina influența acestei proceduri MCAO în dezvoltarea tulburărilor emoționale, în principal a PSD.

Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.

Protocol

Comitetul pentru îngrijirea animalelor de la Universitatea Ben-Gurion din Negev, Israel a aprobat toate procedurile de tratament și testare utilizate în acest protocol.

1. pregătirea șobolanilor pentru procedura experimentală

Notă: Selectați șobolani Sprague-Dawley masculi adulți cu greutatea de 300-350 g.

  1. Găzduiți șobolanii, patru pe cușcă, într-un Vivarium la 22 ° C și 40% umiditate, cu un ciclu inversat de 12 ore de lumină/întuneric (se oprește la 8:00 a.m.) și acces nelimitat la alimente și apă.
  2. Alocați șobolanii la întâmplare la două grupuri, și anume un grup MCAO (n = 24) și un grup Sham (n = 19).

2. pregătirea șobolanilor pentru operație

3. chirurgie (tehnica MCAO)

Notă: Efectuați o intervenție chirurgicală așa cum este descris de Boyko și colab. 28 și utilizați instrumentele furnizate de McGarry și colab. 29 și uluç și colab. 30 .

  1. Faceți o incizie ventrală a liniei medii și disecați fascia superficială.
  2. Efectuați cu atenție o disecție ascuțită și puternică în interiorul celor trei mușchi în formă de triunghi (mușchiul sternohioidian, digastric și sternomastoidian) pentru a identifica arterele carotide (TBI, ICA și artera carotidă comună [CCA]).
  3. Disecați cu atenție și expuneți CCA și ICA potrivite.
  4. Separați CCA dreapta și ICA de nervul vag.
    Notă: Prin identificarea arterelor carotide așa cum este stipulat în pasul 3.2, ICA ar fi recunoscută ca jumătate din ramurile CCA împreună cu TBI.
  5. Introduceți o sondă monofilament (nylon bont sau nylon 4-0 acoperit cu silicon) direct prin ICA,

4. recuperare post-chirurgicală

  1. Administrați 5 ml soluție salină 0,9% la fiecare șobolan intraperitoneal, imediat după operație, pentru a preveni deshidratarea.
  2. Administrați necondiționat analgezia în prima zi după operație; utilizați meloxicam 1 mg/kg SQ q24 h. dați dipironă diluată (0,5 g dizolvată în 400 ml apă potabilă) șobolanilor care prezintă simptome de durere în primele 3 zile.
  3. Sacrificați orice șobolan convulsiv (convulsiile sunt cauzate de presiunea intracraniană crescută din edemul cerebral sau hemoragia cerebrală 28).

5. scorul de severitate neurologică 31

Notă: Această procedură este efectuată de doi observatori care nu sunt implicați în procedura chirurgicală; testează deficite neurologice și niveluri de deficite motorii pe un scor cumulativ de 0-4 32. Evaluarea acestui scor se poate face la diferite intervale de timp; în această investigație, a fost efectuată la 50 de minute, 24 de ore, 7, 15 și 30 de zile după operație. Iată pașii pentru a evalua senna. Deși nu este o necesitate în această situație, acest scor este necesar pentru a determina accidentul vascular cerebral la rozătoare pentru a administra tratamentul.

  1. Așezați șobolanul pe o podea ceramică și lăsați-l să se miște liber timp de 1 min.
  2. Trageți ușor șobolanul înapoi de coadă și evaluați după cum urmează.
    1. Scor șobolanul cu un scor de 0 pentru niciun deficit neurologic.
    2. Evaluați șobolanul cu un scor de 1 pentru flexia membrelor anterioare.
    3. Evaluați șobolanul cu scorul 2 pentru aderența contralaterală slabă a membrelor anterioare.
    4. Evaluează șobolanul cu un scor de 3 pentru încercuirea părții paretice atunci când este aruncat de coadă.
    5. Evaluați șobolanul cu scorul 4 pentru cercul spontan 32 .
      Notă: Dacă se observă mai multe reacții, se preferă acțiunea cu un scor mai mare.