Monitorizarea fenilalaninei din sânge pentru respectarea dietei la pacienții cu

monitorizarea

  • rezumat
  • Principal
  • MATERIALE ȘI METODE
  • Participanții la studiu
  • Mostre de sânge
  • Analiza plasmatică a aminoacizilor prin AAA
  • Analiza aminoacizilor petelor de sânge uscate prin HPLC cu detecție fluorometrică
  • Analiza aminoacizilor a petelor de sânge uscate tandem de MS/MS
  • Evaluarea dietetică
  • analiza statistică
  • REZULTATE
  • DISCUŢIE

rezumat

Scop: Monitorizarea fenilalaninei în sânge este critică pentru gestionarea fenilcetonuriei. Am comparat trei metode de măsurare a concentrației de fenilalanină în sânge: analizorul de aminoacizi, cromatografia lichidă de înaltă performanță cu detecție fluorometrică și spectrometria de masă tandem.

Metode: Am studiat 22 de pacienți cu fenilcetonurie, cu vârste cuprinse între 12 și 48 de ani, care au participat la tabăra noastră metabolică. Sângele a fost colectat în tuburi heparinizate (pentru analiză de către analizorul de aminoacizi) sau hârtie de filtru (pentru analiză prin cromatografie lichidă de înaltă performanță cu detecție fluorometrică și spectrometrie de masă tandem).

Rezultate: Concentrațiile plasmatice de fenilalanină din sânge măsurate de analizorul de aminoacizi au fost semnificativ mai mari decât cele obținute din sângele integral pe hârtie de filtru prin cromatografie lichidă de înaltă performanță (diferență: 102 μM; interval de încredere 95%: 23, 181) și masă tandem spectrometrie (diferență: 137 μM; interval de încredere de 95%: 58, 216). Concentrațiile de fenilalanină din cromatografia lichidă de înaltă performanță și spectrometria de masă tandem nu au fost semnificativ diferite (P = 0,5).

Concluzii: La monitorizarea concentrațiilor de fenilalanină din sânge pentru respectarea dietei, clinicienii trebuie să ia în considerare metoda utilizată; Testele de sânge integral din hârtie de filtru au fost în mod constant cu aproximativ 15% mai mici decât testele de plasmă.

Principal

Fenilcetonuria (PKU) este o eroare metabolică înnăscută care rezultă dintr-o mutație genetică recesivă, de obicei în gena care codifică fenilalanina hidroxilaza, o enzimă responsabilă de hidroxilarea aminoacidului fenilalanină (Phe) la tirozină (Tyr), intermediar în producția de neurotransmițători. Dacă PKU nu este tratat, metaboliții Phe se acumulează și neurotransmițătorii scad, ducând la întârziere mintală, tulburări de comportament și convulsii. Cu toate acestea, aceste efecte negative pot fi prevenite cu succes prin tratamentul dietetic, dacă au început în primele zile de viață, motiv pentru care toate statele includ acum PKU în panourile lor de screening pentru nou-născuți.

Deși nu există linii directoare universale, o abordare general acceptată pentru gestionarea PKU este o dietă strictă care include cantitatea de proteine ​​intacte necesare pentru a menține concentrațiile de Phe din sânge în intervalul de tratament și suplimentarea cu o formulă metabolică fără Phe. (Adică alimentele medicale) astfel încât concentrațiile de Phe în sânge să nu depășească 360 μM (6 mg/dL; pentru a converti μM în mg/dL, împărțiți la 60) cel puțin până la 6 ani. 1 Concentrații mai mici de Phe au fost asociate cu abilități cognitive normale la adolescenți și adulți, indicând faptul că rezultatele optime pot fi obținute atunci când nivelurile de Phe sunt menținute la 120-360 μM până la 12 ani și 120-900 μM la acel moment. 2 Controlul strict al concentrației de Phe în sânge este, de asemenea, critic în timpul sarcinii; un copil născut de o mamă a cărui PKU nu se află sub control metabolic poate suferi de retard mental, microcefalie și insuficiență cardiacă congenitală. 3

Scopul respectării dietei pe tot parcursul vieții înseamnă o nevoie critică de metode simple, rapide și exacte de monitorizare a concentrațiilor de Phe din sânge. O metodă simplă de screening pentru PKU la nou-născuți, Guthrie Bacterial Inhibition Assay, 4 este în uz de mai bine de patru decenii. De atunci, au fost dezvoltate mai multe metode noi, inclusiv analizorul de aminoacizi (AAA), fluorometria, 5 cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC), 6, 7 și spectrometria de masă tandem (MS/MS). 8, 9 Aceste noi tehnici s-au dovedit a fi vitale în îmbunătățirea preciziei și vitezei cu care se poate efectua screeningul nou-născutului, 10, 11, dar puține studii au examinat validitatea acestor metode pentru analiza cantitativă a concentrațiilor. necesare pentru monitorizarea pacientului.

Pacienții cu PKU diferă în ceea ce privește cantitatea de enzimă activă, preferințele gustative pentru alimentele medicale și dorința de a respecta o dietă prescrisă. Toți acești factori fac tratamentul extrem de individualizat și monitorizarea critică. La Divizia de Genetică Medicală a Universității Emory, vedem în mod obișnuit pacienți cu PKU la clinicile metabolice și la o tabără anuală de vară, unde AAA extrage și testează sânge. Între aceste vizite, pacienții efectuează înțepături la domiciliu, își pătează sângele pe hârtie de filtru și trimit eșantionul la clinica noastră, unde este analizat prin HPLC sau, mai recent, prin SM/MS. Deoarece același pacient este probabil să-și testeze sângele folosind AAA și HPLC sau MS/MS sau, eventual, toate cele trei metode utilizate în prezent în laboratoarele noastre, am fost interesați să comparăm concentrațiile de Phe din sânge obținute din aceste trei metode. Prin urmare, obiectivul nostru a fost de a analiza modul în care cele trei metode (plasmă AAA și HPLC și filtru de hârtie cu pete de sânge integral MS/MS) se compară pentru a monitoriza concentrațiile de Phe din sânge.

MATERIALE ȘI METODE

Participanții la studiu

Tabăra metabolică a fetelor de la Universitatea Emory a fost creată în 1994 pentru a răspunde nevoilor adolescenților care trebuie să facă față menținerii unei diete restrictive și a concentrației dorite de Phe în sângele lor. 12 fete adolescente au fost atacate mai întâi, din cauza efectelor potențial dăunătoare ale unui control metabolic slab la descendenții lor; Cele mai noi tabere ale noastre au fost extinse pentru a include femei de diferite vârste. Campingii petrec o săptămână locuind într-o casă din campus cu cercetători în metabolizare și nutriționiști care servesc drept „consilieri de tabără”. Activitățile din tabără includ PKU și educație dietetică, cursuri de gătit, pregătirea alimentelor medicale, noi probe de suplimente și ieșiri sociale. Am obținut date pentru această analiză de la participanții la o tabără de o săptămână în 2004: 25 de fete și femei cu vârste cuprinse între 12 și 48 de ani.