Expresia aberantă a receptorului mer tirozin kinază contribuie la leucemogeneză în

aberantă

  • Subiecte
  • rezumat
  • Introducere
  • Rezultate
  • Mer este exprimat aberant în LMA
  • Mer activează supraviețuirea celulară și căile anti-apoptotice
  • Inhibarea Mer cu eliminarea Mer shRNA
  • Inhibarea Mer utilizând shRNA scade fosforilarea p38, ERK și CREB
  • Inhibarea Merului induce apoptoza mieloblastelor in vitro
  • Inhibarea Mer scade proliferarea mieloblastelor in vitro
  • Reintroducerea Mer salvează capacitatea mieloblastelor de a se sustrage apoptozei și de a forma colonii
  • Inhibarea Mer crește supraviețuirea fără leucemie in vivo
  • Discuţie
  • Informatie suplimentara
  • Fișiere imagine
  • Figura suplimentară S1
  • Documente Word
  • Tabel suplimentar S1
  • Tabel suplimentar S2
  • Tabel suplimentar S3
  • Figuri și tabele suplimentare Legende

Subiecte

  • AML
  • Proteine ​​oncogene
  • Oncogeneza
  • O remediere a erorilor la acest articol a fost publicată pe 5 septembrie 2016.

rezumat

Cercetări recente în AML au relevat doar câteva proteine ​​kinaze exprimate aberant sau mutate care servesc drept potențiale ținte terapeutice. Raportul alelic ridicat al mutației interne de dublare a tandemului FLT-3 a fost asociat cu un prognostic slab și s-au dezvoltat inhibitori de molecule mici care vizează celulele care exprimă FLT-3. 6,7 Kit-ul AML pozitiv, găsit la un număr mare de pacienți recidivanti, este asociat cu un prognostic slab și a fost, de asemenea, vizat de inhibitori de molecule mici. 8,9 Sunt necesare opțiuni de terapie mai bine direcționate pentru a oferi un tratament mai eficient al LMA sau pentru a permite o scădere a chimioterapiei de intensitate mare.

În acest manuscris, raportăm că Mer este aberant supraexprimat în majoritatea eșantioanelor de la pacienții pediatrii și adulți cu LMA, comparativ cu progenitorii mieloizi normali. Mer este, de asemenea, exprimat în marea majoritate a liniilor de celule AML. Activarea Mer în liniile celulare AML a produs semnalizare de supraviețuire și proliferare, inclusiv fosforilarea ERK1/2 și AKT, precum și p38 MAPK (p38), MSK1, CREB, ATF1 și STAT6. În cele din urmă, arătăm că inhibarea Merului prin interferența ARN în liniile celulare AML umane duce la o creștere semnificativă a apoptozei, la scăderea potențialului de formare a coloniilor și la întârzierea dezvoltării leucemiei la șoarecii imunocompromiși. Direcționarea terapeutică a expresiei Mer aberante în LMA este atractivă, permițând potențial rezultate mai bune la pacienții cu risc crescut, terapie combinată de intensitate redusă la pacienții cu risc scăzut sau o opțiune terapeutică pentru cei care nu pot tolera chimioterapia cu risc ridicat.

Rezultate

Mer este exprimat aberant în LMA

Pentru a evalua expresia Mer în LMA, am evaluat 14 linii celulare mieloide diferite. Mer a fost detectat prin imunoblotare în majoritatea liniilor celulare analizate ca o proteină de 150-180 kD (variația de mărime a fost atribuită glicozilării diferențiale 18). Analiza citometrică de flux a confirmat constatările; celulele care au fost pozitive pentru Mer au demonstrat o intensitate a fluorescenței mai mare comparativ cu celulele colorate cu controlul izotipului imunoglobulinei G1 de șoarece, în timp ce celulele negative nu (Figura 1 și Tabelul suplimentar S1). Analiza noastră a relevat un grad ridicat de corelație între rezultatele citometriei de imunoblot și flux și a indicat că există un anumit grad de expresie Mer în 86% (12 din 14) din liniile celulare AML. În această analiză a liniei celulare, expresia Mer nu a fost asociată cu nicio clasificare franco-american-britanică (FAB) sau a Organizației Mondiale a Sănătății (OMS), anomalie citogenetică, vârsta pacientului din care a fost derivată linia celulară și nici nu a fost corelată cu Alte caracteristici clinice cunoscute (tabelul suplimentar S1).

Mer este exprimat în linii celulare AML. ( la ) Lizatele celulare întregi derivate din liniile celulare AML au fost supuse analizei imunoblot cu un anticorp anti-Mer. Acest blot reprezentativ arată detectarea proteinei Mer (150-180 kD) în mai multe linii celulare AML. Actina a fost detectată ca un control de încărcare. ( ) Expresia Mer pe suprafața celulei a fost determinată prin citometrie în flux după colorare cu un anticorp Mer primar anti-uman și un anticorp secundar conjugat PE (histogramă gri). Colorarea nespecifică a fost determinată folosind un anticorp primar de control al izotipului IgG1 și un anticorp secundar conjugat cu PE (histogramă albă). Sunt prezentate liniile celulare reprezentative Mer negative (HL-60) și Mer pozitive (KG-1).

Imagine la dimensiune completă

Mer este exprimat în majoritatea probelor de măduvă osoasă diagnosticate derivate de la pacienții cu LAM, dar nu și în măduva osoasă normală. Mieloblastele colectate în diagnosticul pacienților cu LMA au fost analizate prin citometrie în flux pentru exprimarea Mer. ( la ) Celulele care exprimă CD33 și CD45 uman au fost analizate după colorare cu un anticorp Mer anti-uman de șoarece și un anticorp secundar conjugat PE pentru expresia Mer (histogramă gri). Colorarea nespecifică a fost determinată folosind un anticorp martor de izotip IgG1 de șoarece și un anticorp secundar conjugat PE (histogramă albă). Profilurile reprezentative de citometrie în flux sunt prezentate pentru Mer-pozitive (> 20% celule pozitive), Mer-dim (10-20% celule pozitive) și Mer-negative (